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标题: 不同公司生产的同种抗体对组织的敏感性和特异性差别会出现如此大的结果吗？ [打印本页]

作者: mishell 时间: 2010-9-7 11:30 标题: 不同公司生产的同种抗体对组织的敏感性和特异性差别会出现如此大的结果吗？

我使用乳癌的切片（样本片）做C-erbB2染色，同时做阳性对照，阳性对照强阳性，而样本片阴性，但是同样的样本片其他医院做出中强度阳性结果，还有CK(34beta E12)也会出现这样的结果。不知道原因在哪里？因为做阳性对照的结果是阳性，说明实验操作步骤基本没问题，那么就在于我们使用的抗体厂家不一样，但是不同厂家的抗体出现如此大的差异可能吗？如果是这样，那么我们只用一个厂家的抗体对于结果的可信度该如何把握呢？

作者: mishell 时间: 2010-9-7 11:33

请大家帮忙分析一下

作者: dingwei 时间: 2010-9-7 13:05

阳性对照片选择有问题，我们选择阳性对照片都喜欢用强阳性的切片，这种片子做出阳性结果，只代表你的操作过程没有问题，不代表你的抗体稀释比是正确的，抗原修复就是正确的：强阳性的组织很稀的抗体也能很好表达，而中等阳性、弱阳性的就可能不表达。正确的阳性对照片应该选择：强阳性、中等阳性，弱阳性三种组织结合的片子，只有这样，才能真正找到问题。

作者: mishell 时间: 2010-9-7 15:37

谢谢丁老师，C-erbB2也做了中等强度和弱阳性片，也都可以出现较好的阳性结果，至于更改抗体稀释比例还没做过，接下来我更改抗体稀释比例试试。

作者: savant0196 时间: 2010-9-9 10:14

现在各公司提供的抗体质量都差不多了，出现明显差异的情况少见，象你这样自己做的是阴性，而别人做的是中等阳性，应该不是试剂的问题，而是操作的问题。建议进一步前往上级医院进行学习，以改善免疫组化的操作，避免这种假阴性或假阳性的情况发生。另外二抗也是关键，建议购买好点的试剂。

作者: mishell 时间: 2010-9-10 08:52

现在我还遇到这样的问题，做Ki67肠癌的免疫组化染色，同样的组织，不同公司的抗体，抗体稀释比例一家是1:100,一家是1:25,做出的结果是1:100是强阳性，1:25是弱阳性，且着色范围也小很多。我还做了Ki67鼠单克隆抗体和KI67兔单克隆抗体，所做结果是阳性强度差别不大，但是着色范围有差异，Ki67鼠单克隆抗体在正常的肠腺体中为阴性，而KI67兔单克隆抗体在正常的肠腺体中有散在表达，这种情况该如何分析呢？请大家帮忙讨论~~~

作者: shanghainese 时间: 2010-9-10 12:31

即使是抗同样抗原的抗体：
1. 不同的单克隆会有不同的结果。
2. 不同的批号的多克隆会有不同的结果。
3. 不同的浓度下，抗体会有不同的结果。
4. 不同的操作步骤，会有不同的结果。
5. 不同的温度和时间，会有不同的结果。
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