标题:
一种减少冷冻切片组织内冰晶的处理方法（转载节选）
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作者:
九日
时间:
2011-4-23 17:04
标题:
一种减少冷冻切片组织内冰晶的处理方法（转载节选）
1 材料与方法
1. 1 标本来源 术中脑组织活检标本10 例,将同一组织标本分成2 块。实验组采用TPS2MW 法处理,另一组采用常规冷冻制片法。
1. 2 组织保护液的配方 聚乙烯醇2124 2 g ,聚乙烯吡咯烷酮K230 015 g ,蔗糖20 g ,麝香草酚0105 g ,蒸馏水100 ml ,水浴加热溶解后即可使用。
1. 3 仪器 YEY781B2医用微波炉(浙江临安电子器材厂) 。
1. 4 组织前期处理及冷冻制片方法 (1) 将实验组的脑组织标本放入盛有50 ml 组织保护液的烧杯中,置微波炉内进行处理,6 档4 min。(2) 取出组织进行常规冷冻制片,切片厚4～5μm。(3) 组织经95 %乙醇固定,自来水洗,HE 染色,中性树胶封固。常规制片法:组织取材后直接冻结、切片、95 %乙醇固定、水洗及HE 染色。
2 结果
TPS2MW处理组:脑组织细胞结构完整,染色清晰,核质对比分明(图1) ;常规制片组:脑组织切片内冰晶较多,细胞结构变形严重(图2) 。
3 讨论
术中冷冻切片诊断是病理科的急诊工作,其重要性和责任性都很大。因此,如何提高冷冻切片病理诊断的准确性是大家关注的问题。其中冷冻切片的质量至关重要,特别是如
消除冷冻组织切片内的冰晶,是病理技术人员要解决的一个难点。生物体内细胞中水分占80 %～ 90 % , 水在各种组织中含量最多〔1〕,冷冻后常产生粗大的冰晶挤压周围组织,改变甚至破坏组织原来的形态结构,致使病理医师无法及时准确地获得病理诊断依据。有人主张采用进口包埋剂OCT 包埋组织,可以减少组织内冰晶的产生,我们经多次实验,结果均不甚理想。本文同意包埋剂只能起到支持及粘附组织作用的观点。为了减少组织内冰晶的产生,现多采用液
氮及干冰方法对组织进行骤冷〔2～4〕,但要掌握好冰晶产生的临界温度较困难。我们根据渗透压及微波的作用原理,经过大量实验,在制片前将待切的组织采用TPS2MW 法进行处理,然后冷冻制片。其作用机制可能为: (1) 组织保护液中的聚乙烯醇2124 、聚乙烯吡咯烷酮K230 及蔗糖均为高分子物质,其配制
液渗透压较高,而组织内的渗透压相对较低。由于组织内外渗透压的不同,保护液可吸收组织中的水分,使组织内含水量明显降低。在冷冻制片时,可明显减少组织内冰晶形成的机会。(2) 在微波作用下,组织保护液可快速进入组织内,把组织内水分置换出来,从而也减少了组织内冰晶的形成。
实验结果显示,用此方法制备的冷冻切片,组织内冰晶明显减少,且组织结构完整,染色结果清晰,核质对比分明。我们认为该法除了能有效地减少组织内冰晶的形成外,还对组织结构有很好的保护作用,其保护机制可能是由高分子物质组成的保护液进入组织后覆盖在细胞表面,保护了细胞膜及其它细胞内成分,从而防止冷冻对组织的损害。由于微波辐射可以提高黏滞性所依赖的温度,提高分子的运动速度,而使液体的运输加快,增加弥散、渗透和交换效率〔5〕,从而达到了快速诊断的目的。我们认为微波本身可能还兼有对组织的热固定作用,而使组织结构保存良好。采用本方法对组织进行处理,应注意以下几点: (1) 在不影响病理诊断的前提下,标本取材尽量小一些,组织厚度勿超过4 mm ,这样有利于组织的快速冻结;否则,组织过大,冷冻时间过长,组织内容易产生冰晶。(2) 若术中需要冷冻,相
关科室应通知病理科,以便提前开机做好准备,避免缓慢冷冻而产生冰晶。因为冷却速度越快,过冷温度越低,所形成的晶核数量越多,晶体来不及扩大就被冻结,从而失去了形成较大冰晶的机会。(3) 固着器上OCT 等组织包埋剂不能放置过多,否则冷冻时间过长,也易产生冰晶。(4) 需要术中进行快速病理诊断的活检组织,最好用一次性塑料或乳胶手套盛放,切忌用纱布包裹组织,以免纱布上的线毛粘在组织上,既不利于制片,也易损伤刀刃。(5) 临床医师送检标本时不要用生理盐水浸泡或用湿纱布包裹组织,由于液体浸泡后,组织内水分会增加,造成冷冻后组织内冰晶形成过多。(6) 用95 %乙醇固定切片较佳,用AF 液固定则容易掉片。
此文转载于《临床与实验病理学杂志》 2002 Dec ;18 (5)
作者：田玉旺 丁华野 李 琳 李 丽 胡 海
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