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标题: 包埋后切片，组织的位置是空洞或一条条小碎片，是怎么原因呀？ [打印本页]

作者: star8823823 时间: 2011-11-3 11:24 标题: 包埋后切片，组织的位置是空洞或一条条小碎片，是怎么原因呀？

国产脱水机，两个程序同一固定的组织块肝和一个动物组织鸡的肾，包埋后切片肝组织的位置两个程序都是空洞或一条条小碎片，而滤泡样组织在程序1就能切到完整的组织但很皱，而程序2就也是空洞和碎条是怎么原因呀？

脱水程序1：50%乙醇 5h --> 60% 4h --> 70%乙醇10h --> 85% 1.5h -->95%I 1h -->95%II 30min -->100%I 30min -->100%II 30min -->乙醇：二甲苯=1:1 30min -->二甲苯I 15min -->二甲苯II 肉眼观察完全透明后转入下一步 -->二甲苯：石蜡=1：1 61度 1h --> 石蜡I 61度 1.5h -->石蜡II 61度 1.5h -->包埋

脱水程序2：70%乙醇12h --> 85% 30min -->95%I 30min -->95%II 30min -->100%I 40min -->100%II 20min -->乙醇：二甲苯=1:1 30min -->二甲苯I 30min -->二甲苯II 在肉眼观察完全透明后转入下一步 -->石蜡I 61度 1h -->石蜡II 61度 1h -->石蜡III 61度 2.5h --> 包埋

所有用到的石蜡溶点都是55-59度的，经过反复烧溶5次以上投入使用。

请各位老师指点！！

作者: 九日 时间: 2011-11-3 16:28

85%乙醇到100%乙醇时间短了，脱水的关键就在这一步。组织脱水不彻底，以后就不顺利。

作者: flyaqmt 时间: 2011-11-4 08:10

脱水时间太长了，动物组织本身就小，至少要把你现在程序前面几步脱水的时间减半，我原来给研究生课题做大鼠时70%乙醇1h --> 85% 1h -->95%I 30mim -->95%II 30min -->100%I 30min -->100%II 30min -->二甲苯20min -->二甲苯I 20min -->二甲苯20min --> 石蜡I 56度 1h -->石蜡II 56度 1h -->石蜡IIi 56度 1h 包埋

作者: star8823823 时间: 2011-11-13 08:31 标题: 我去试了，不出现空洞了，但还是会碎

其实我用那么高熔点的石蜡会不会也有点影响？要不要改用54——56度。

[ 本帖最后由 star8823823 于 2011-11-13 09:01 编辑 ]

作者: Tony 时间: 2011-11-13 23:02

your paraffin temperature are not high at all,infiltration temperature should be above the melting temperature 2'C-4'C,from low to high,especially lung,liver ,which is too soft ,too much air in it,the infiltration time shoud be increased to get it hard,so cutting sections will be easy.

作者: dingwei 时间: 2011-11-14 13:29

1、组织发脆的原因不是脱水时间长了，而是二甲苯：石蜡=1：1 ，石蜡里是不能加二甲苯的。而且脱水液也没必要用酒精和二甲苯1：1。
2、很多人认为小标本、特别是小动物肝，组织脱水时间长会发脆，真是这样吗？还是我们一直以来的错觉？脱水每道半小时、或每道1小时、或每道8小时，有区别吗？我的实验结果是一样的。细胞长时间脱水不会使组织发脆，这是我总结了几十年经验后得出的的结论。

作者: Tony 时间: 2011-11-14 18:27

xylene is a universal solvent,it can mix with alcohol and paraffin,this is the keypoint of being a clearing agent,many people prefer mix xylene and alcohol together,both dehydration and clearing.

作者: star8823823 时间: 2011-11-14 22:03 标题: 回复 7# 的帖子

thanks,you opinion let me know the most important thing about my study.

作者: star8823823 时间: 2011-11-14 22:19 标题: 谢谢丁老师指点

就丁老师所言，这些天也做了一些比对，按照我的脱水程序2步骤，入二甲苯前的每道试着用不同的时间，最短的20分钟，1小时，2小时，。。。最长的5个小时，出来的结果还是都碎了，比较纳闷，现在正在试后面的从二甲苯往后的步骤时间。
小动物的真不太好弄。。。
国产的机子应该不会有这么大的差距吧

作者: dingwei 时间: 2011-11-15 07:59

1、和国产的机子没有关系。
2、只要脱水充分，和长时间脱水没有关系。
3、和梯度酒精浓度有关系，但你的梯度很好，所以也没有关系。
4、和二甲苯有关系，二甲苯时间长了，容易脆。所以，脱水液中不要加，浸蜡石蜡中更不能加。
5、小动物切片时蜡块不能冰，有时在冰上放几秒就可以了，主要和动物本身的质地相关。

作者: star8823823 时间: 2011-11-28 09:13 标题: 这次用了鸡的肝和肾一起做，切肾的好好的，但肝还是总切碎，真摸不着头脑

70%乙醇5h --> 85% 2h -->95%I 1h -->95%II 1h-->100%I 30min -->100%II 30min -->二甲苯20min -->二甲苯I 20min -->二甲苯20min --> 石蜡I 60度 1h -->石蜡II 60度 1h -->石蜡III 60度 1h 包埋。
我开始以为是肝块修得太大了，就 1×1×0.5cm ，0.5×0.5×0.5cm ，0.3×0.3×0.3cm ，结果还是全切碎，为什么……?

作者: dingwei 时间: 2011-11-28 11:01

动物肝脏的本质所决定。有在切片时注意方法，如不冻，慢切。

作者: zhijiu1 时间: 2012-1-11 01:49 标题: 动物肝脏组织切片体会

肝脏是最容易破碎的组织之一。
我的经验：准备一个盒子（护士们经常用的白色的长方形搪瓷盘，1-1.5寸深的那种，切片前一天加水3/4左右，盖上盖子放冰箱（注一放平，如是风冷冰箱，离出风口远点，免得冷冻时温度降得不均匀，病面不平整。在切片时，现在冰盒里加点水（大约100ml），冰上面盖上纱布。蜡块粗切后修平整后，细切3-5刀，把蜡块放在冰盒的纱布上，室温1小时左右即可。这时开始切片就不会有破碎的问题了。如果还是不行就适当延长一下时间。另外，这样处理的切片在漂片时可能不平整，解决的办法是在低于包埋蜡熔点4-5度（理论值，我一般用40C的，包埋蜡熔点56-58C)的温水里漂片就会展平。还有就是在把蜡块防冰上以前，可先放在温水浴中3-5秒，这样可适当缩短冰上“水化”的时间。

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