中华病理技术论坛 - Powered by Discuz! Board

标题: 大鼠内皮细胞CD31免疫组化鉴定 [打印本页]

作者: 摞贝 时间: 2012-5-3 11:15 标题: 大鼠内皮细胞CD31免疫组化鉴定

  目的：利用CD31免疫组化鉴定大鼠内皮细胞
流程：
1.  细胞爬片
2.  4％多聚甲醛固定30min
3.  30 ％过氧化氢1份  加纯甲醇 50份，室温浸泡30min
4. 5％BSA室温封闭20min
5. BD公司一抗（小鼠抗大鼠)适当稀释后，4度冰箱过夜，第二天37度45min.
6.  羊抗小鼠二抗室温20min
7. SABC室温20min
8. DAB显色30min
9. 苏木素复染2min
10.碱水返蓝。
有做过的老师请指正，感激不尽。。。

作者: shanghainese 时间: 2012-5-3 11:59

CD31应该在细胞膜上。
你的 isotype control 呢？

作者: 摞贝 时间: 2012-5-3 12:45 标题: 回复 2# 的帖子

CD31好像是在胞浆里额

作者: shanghainese 时间: 2012-5-3 13:24

TLD-3A12，你用的是这个克隆吗？
The TLD-3A12 antibody is tested for immunohistochemical staining of acetone-fixed frozen sections and zinc-fixed
paraffin sections.
它是不能用在多聚甲醛固定的组织细胞上的。

作者: 摞贝 时间: 2012-5-3 16:43 标题: 回复 4# 的帖子

晕死了。。。。。

作者: shanghainese 时间: 2012-5-9 11:58

用丙酮固定.

作者: 悠悠我心 时间: 2012-5-9 18:56

我做过冰冻片，多聚甲醛固定后再修复可以做出来。不修复就做不出来。

作者: shanghainese 时间: 2012-5-11 12:03

引用:

原帖由 悠悠我心 于 2012-5-9 18:56 发表
我做过冰冻片，多聚甲醛固定后再修复可以做出来。不修复就做不出来。

冰冻片丙酮固定,就不需要修复这一步骤了.

作者: 摞贝 时间: 2012-5-14 15:23 标题: 回复 6# 的帖子

您好，我做的是细胞爬片可以用丙酮固定吗？您做的是石蜡切片还是细胞爬片呢？

作者: 摞贝 时间: 2012-5-14 15:24 标题: 回复 7# 的帖子

细胞爬片可以修复吗？如果能的话是枸橼酸钠修复吗？

作者: shanghainese 时间: 2012-5-14 22:04

引用:

原帖由摞贝于 2012-5-14 15:23 发表
您好，我做的是细胞爬片可以用丙酮固定吗？您做的是石蜡切片还是细胞爬片呢？

细胞爬片当然可以丙酮固定。

作者: 摞贝 时间: 2012-5-15 10:51 标题: 回复 11# 的帖子

老师可以告诉我冰冻具体浓度吗？或者是步骤额不胜感激！

作者: 摞贝 时间: 2012-5-15 10:52 标题: 回复 11# 的帖子

丙酮具体浓度

作者: shanghainese 时间: 2012-5-15 12:51

I) Culture cells to 50-70% confluency. Some cells (endothelial/epithelial) may require a higher level of confluency. For suspension cells in a regular petri dish or flask, transfer enough cells suspended in medium to each well of a poly-D-lysine-coated microslide. Then Incubate microslide in CO2 incubator from 1 hour to overnight to allow cells to attach to the bottom of the slide. The incubation time varies depending on the suspension cell used. Check for cell attachment using a microscope.

Gently aspirate medium from the wells, wash the attached cells briefly with 1x PBS and dry cells.

II) Fix slides in cold acetone (-20oC) for 10 minutes, dry again and followed by 2 PBS washes.

作者: 悠悠我心 时间: 2012-5-15 18:50

您好！細胞爬片我沒做過，我只做過冰凍片，您還是按照shanghainese老師所說的試試吧。

作者: 摞贝 时间: 2012-5-24 15:33 标题: 回复 14# 的帖子

谢谢shanghainese老师的指导

作者: shanghainese 时间: 2012-5-24 22:15

不用客气。

欢迎光临中华病理技术论坛 (http://bbs.zhbljs.com/bbs/)