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HE染色褪色怎么办？
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作者:
王瑾
时间:
2015-11-4 22:06
标题:
HE染色褪色怎么办？
各位老师：我科室最近一年的HE染色褪色现象非常严重！我的染色步骤：100度温度烤片15分钟—》环保透明剂透明I、II两步各3分钟—》梯度酒精—》苏木素（自配）10分钟—》水洗—》分化10秒—》水洗—》返蓝（碳酸锂）—》水洗—》75%酒精5秒—》伊红（醇溶）—》75%酒精10秒—》85%酒精10秒—》95%酒精3分钟—》100%酒精I、II各3分钟—》吹风机吹干—》环保透明剂I、II、III各3分钟—》环保胶封片！不知道哪个步骤出问题了！向老师们求教！
最近还出现一个问题：片子不干净，镜下细胞有皴的现象！
作者:
小小技术员
时间:
2015-11-4 23:04
褪色是个比较复杂的问题，跟很多都有关的，我觉得有以下原因，有可能不全面：
组织处理没处理好，就是组织固定，脱水没弄好
染色液的酸碱度不合适
染色后脱水透明不当
封片胶的酸碱度不合适
封片时没封好（进入水分，气泡，或者胶少没封全），或者封片胶挥发（我们就遇到过，用的环保胶水，片子放几个月里面全是空洞，里面环保封片胶没了）
切片保存不当等
具体只能你自己去根据你们的情况分析解决了
只能从你给的信息给一点意见，
仅供参考
1、拷片温度过高65℃左右 拷片半个小时到一个小时。
2、切片脱蜡两缸各3分钟 时间太短，建议每缸调到5-10分钟
3、梯度酒精后水洗1分钟后再染苏木素
4、反蓝后水洗时间5-10分钟
5、伊红前一步不用过酒精
6、后面透明前不要吹干片子，去掉吹干那一步
7、湿封片
组织一定要处理好，反蓝后水洗时间要长一点，或者不用反蓝液直接自来水水洗反蓝。透明最好用二甲苯透明，封片最好用中性树胶湿封，
因为那些环保封片胶超贵不说，关键是不知道里面是什么成分，我们之前就是用了这东西，片子放段时间后里面全是空洞
如果你们是很短时间就褪色特别严重，估计是反蓝后水洗不够，封片问题（吹干后透明封片）或者是封片胶的问题（环保透明剂和环保封片胶）的可能性大。
本人对这方面问题认识有限，只能给你部分提示，不代表我的意见就是对的，如果有不对的地方，还请多多包涵。
作者:
王瑾
时间:
2015-11-6 11:49
谢谢老师！酸碱度我们从来没测过！我再按你说的步骤试一下！谢谢
作者:
王瑾
时间:
2015-11-6 11:55
苏木素之前有水洗，忘记写了，脱水之后如果不吹进透明之后片子上面都是水珠！
作者:
小小技术员
时间:
2015-11-9 13:43
标题:
回复 4# 的帖子
如果天气潮湿，会出现你说的那样，可以加一缸无水乙醇，无水乙醇要勤换，如果还是不行，可以加一缸石炭酸二甲苯（1：3）3-5min，不过后面二甲苯不干净，石炭酸没洗脱干净有残留的话，切片也容易褪色。
作者:
王瑾
时间:
2015-11-9 15:15
谢谢老师！
作者:
罗曼蒂克2674
时间:
2015-11-11 21:39
楼上老师说的很对，补充几点我们的方法，用自来水反蓝吧，15分钟左右，流水。在烤片机烤片15分钟后，可以用65度左右烤箱烤片，把片子放到染色筐内再放入烤箱烤15分钟左右。不知道楼主是在南方还是北方，要是在北方要注意染片室室内温度，这个也很重要
作者:
zyc921115
时间:
2015-11-18 22:13
温度是不是有点高啊
作者:
乐呵呵
时间:
2017-6-24 17:19
温度跟染色有关吗
作者:
tyqypurwq
时间:
2017-7-31 17:03
反蓝可以温水吧
作者:
tyqypurwq
时间:
2017-8-7 21:27
反蓝可以温水吧 比反蓝液好用感觉
作者:
ChenRong
时间:
2017-8-16 16:13
基本同意2楼（小小技术员）的意见，但是伊红前过不过酒精，还要看这伊红是水溶性的还是醇溶性的，建议使用醇溶性的，前面过一道95%乙醇。
蓝化流水时间要长些，1年就不行是个问题，但也不排除苏木素的配置过程和苏木精的本身质量问题。
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