中华病理技术论坛 - Powered by Discuz! Board

标题: 实验病理切片的制作 [打印本页]

作者: 王建君 时间: 2003-12-30 12:34 标题: 实验病理切片的制作

固定：酸性福尔马林（150ml甲醛，800ml水，50ml冰醋酸）
改刀后水洗30分钟
脱水、透明：          大鼠                狗
   80%乙醇       2小时             2小时
   95%乙醇       1小时             1小时
   95%乙醇       1.5小时          1.5小时
   无水乙醇       2小时             2小时
   无水乙醇       2小时             2小时
   二甲苯       15分钟             20分钟
   二甲苯       15分钟             20分钟
         蜡       15分钟             15分钟
         蜡       30分钟             30分钟
         蜡       30分钟             30分钟
包埋，切片
染色：
   二甲苯          5分钟
   二甲苯          10分钟
   二甲苯          10分钟
   无水乙醇       涮洗3次
   95%乙醇          涮洗3次
   90%乙醇          涮洗3次
   80%乙醇          涮洗3次
   70%乙醇          涮洗3次
      水洗          3次
      苏木          5分钟
      水洗          3次
盐酸酒精          涮洗3次
      水洗          3次
      氨水          涮洗3次
      水洗          3次
      伊红          5秒钟
   95%乙醇       涮洗3次
   95%乙醇       涮洗3次
   无水乙醇       涮洗3次
   无水乙醇       涮洗3次
   二甲苯          5分钟
   二甲苯          10分钟
   二甲苯          10分钟

以上时间只针对于新试剂而言，另只做参考，
做实验病理的同行如有不同意见，敬请指教。

作者: 叶子 时间: 2003-12-30 13:19 标题: 实验病理切片的制作

可以向您请教一些非常规问题吗？是相关病理技术的。

作者: 王建君 时间: 2003-12-30 14:11 标题: 实验病理切片的制作

没有问题，请说吧。

作者: 法医 时间: 2004-1-1 09:05 标题: 实验病理切片的制作

我真的不清楚你们为什么这么喜欢用二甲苯透明？难道就是因为时间短吗？但是组织在二甲苯里时间稍微长一些就会发脆，尤其是小动物的组织。我还是认为氯仿更优良，不管怎样，组织在里面过夜都不会发脆。而且毒性要少于二甲苯。

作者: 王建君 时间: 2004-1-2 11:04 标题: 实验病理切片的制作

可否请教，用氯仿透明的程序。

作者: 法医 时间: 2004-1-2 20:55 标题: 实验病理切片的制作

不敢说请教，毕竟我也是新手。只是互相探讨。用氯仿透明的程序与用二甲苯的程序一样，只是简单的把该用二甲苯的步骤换为氯仿罢了。不过氯仿处理组织的时间要长于二甲苯时间至少要乘以4。而且氯仿处理组织不像二甲苯那样，可以清楚地看到透明完成，用氯仿透明完成的组织也是不很透明的。总之，用氯仿是一个经验性的工作，你可以实验一下，看用多少时间合适，而且透明终点如何掌握（组织的形态）。反正我应用于人体组织，厚度为4毫米以下的组织一般处理至少6个小时，再短的时间我没试验过。

作者: shanghainese 时间: 2004-1-3 02:31 标题: 实验病理切片的制作

如用氯仿透明，就象“法医”说的那样。另外氯仿的毒性绝不少于二甲苯。

作者: 法医 时间: 2004-1-4 21:01 标题: 实验病理切片的制作

--另外氯仿的毒性绝不少于二甲苯。
不敢苟同。你去查一下化学品手册，氯仿的毒性绝对要比二甲苯低一个档次。（当然氯仿也有毒，只是我认为毒性要小于二甲苯）二甲苯的刺激性要远大于氯仿，而且主要是造血系统的影响。氯仿在很早以前还做过吸入性麻醉剂（不信去看看《钢铁是怎样练成的》，里面的哥罗仿就是）只是后来发现更安全的麻醉剂才停止使用的（氯仿长期见光可以生成光气）所以...

作者: POWERMAN 时间: 2004-1-20 04:20 标题: 实验病理切片的制作

二甲苯是目前最为常用的透明剂，当然其它还有很多，如：甲苯、氯仿、香柏油、冬青油乃至汽油也可用。
透明的目的主要是：以透明剂取代组织内的脱水剂，而透明剂本身又可被石蜡取代，从而完成组织浸蜡。
当然，组织处理（固定、脱水、透明、浸蜡）的最终是要能制成能切出薄片的蜡块，如果有人能发明一种固定后的组织不经过脱水、透明，而能制成石蜡蜡块的方法，那他的贡献可大的不得了。目前，用硬脂酸混合石蜡，以脱水后的组织不经透明便可浸蜡，也不实为一种好的方法。

作者: hhma 时间: 2004-2-5 00:28 标题: 实验病理切片的制作

同意POWERMAN的意见。二甲苯是较好的也是常用的透明剂，比氯仿利于观察（指组织的透明效果），方便工作。但是一定要根据不同组织设定其处理时间，否则会导致组织硬脆，特别是动物组织。硬脂酸的合理使用，将会减少上述情况的发生。

作者: sissi123 时间: 2004-2-6 21:50 标题: 实验病理切片的制作

我们是用正丁醇脱水兼透明的，3~5天，时间是长一些，可是毒性小了很多。
还有，楼主染色的步骤太复杂了吧？酒精入水和脱水我都只有一次，还好啊！

作者: stmei 时间: 2004-2-7 19:18 标题: 实验病理切片的制作

我的经验是大组织用二甲苯透明较好,而小组织一般用氯仿透明较好.

欢迎光临中华病理技术论坛 (http://bbs.zhbljs.com/bbs/)