标题:
小鼠血管切片 急！
[打印本页]
作者:
sjfm139139
时间:
2007-4-17 17:29
标题:
小鼠血管切片 急！
各位老师好：
我刚开始做小鼠腹主动脉（直径大约2mm）的石蜡切片，但每次切的时候组织都碎掉，中间只有留下一个小洞。后续的工作也就没办法继续了。
由于组织很小，每步骤的时间都缩短： 70%乙醇 1小时
80% 乙醇30分钟
90%乙醇一、二各十五分钟
无水乙醇一、二各十五分钟
二甲苯一 2分钟
二甲苯二数秒钟
石蜡一半小时
石蜡二四十五分钟
由于条件限制没有定向包埋机，每次都是自己用镊子竖直血管，手工包埋，导致石蜡先后凝固，有裂隙。
最终导致切片时总是只剩下一个洞。
已经试验过四五次了，还是没有什么进展，心里万分着急，希望得到各位老师的帮助。谢谢！
作者:
folksmile
时间:
2007-4-17 17:44
啊！不是包埋的事吧，看起来像脱水的问题列，呵呵
作者:
sjfm139139
时间:
2007-4-20 22:38
切片的时候冻腊块是不是很重要啊 ，可以防止碎片 ？
作者:
Ariel
时间:
2007-7-26 19:29
标题:
回复 #3 sjfm139139 的帖子
我也正在做小鼠血管的石蜡切片,切片时蜡易碎,并且该有组织的地方都是空的,根本看不到血管.一开始怀疑是新蜡,后来反复熔了三次,再次包埋,还是不行!
脱水时间如下: 70%酒精 24h 80%酒精24h 95%的 30分钟 95%的 30分钟 100%酒精 30分钟 100%酒精30分钟 100%酒精:二甲苯(1:1) 10分钟 二甲苯 20分钟 浸蜡1 10分钟 蜡二 20分钟
包埋.
所有脱水都是手工做的. 请教本实验室的师兄们,他们没有遇到这样的事情!
请高手指点! 我把所有的血管都包埋了,现在还有没有挽救的余地啊!
否则,我死定了!
作者:
Ariel
时间:
2007-7-27 18:06
标题:
回复 #4 Ariel 的帖子
肯请高手们指点啊! 都怪急死人了.......
作者:
zhaojian
时间:
2007-7-30 17:41
100%酒精再延长十五分钟，二甲苯各延长十分钟，浸蜡延长一个小时。拭一拭
作者:
lucyyan
时间:
2007-7-30 21:46
标题:
小鼠血管切片
70%乙醇 30分钟
80%乙醇 30分钟
95%乙醇（1） 30分钟
95%乙醇（2） 30分钟
无水乙醇（1） 15分钟
无水乙醇（2） 15分钟
二甲苯（1） 2-3分钟
二甲苯（2） 透明为止
石蜡（1） 1小时
石蜡（2） 1小时
试试这脱水时间
作者:
guwei3550
时间:
2007-8-1 10:33
这么麻烦啊!我也是新手帮不上你什么忙了,我也是做血管的,还没有杀死呢,我想问问你,血管取下后就直接放到固定液里吗?那管腔会不会塌陷了呢?怎么防止呢?谢谢!
作者:
Ariel
时间:
2007-8-1 13:32
请问,我那已经包埋的血管是不是就不能再回头脱水和透明了.
因为我所有的小鼠血管都浸蜡包埋了,如果不能回头,我该怎么办啊?
片子都切不出来,我还怎么做免疫组化啊?
作者:
Ariel
时间:
2007-8-1 13:37
我的小鼠血管是取下后就直接固定的,管腔应该会塌陷的.同学说应该先灌流的, 先PBS再固定液灌流,效果会好些! 当时嫌灌流需耗时,费事,就没有做.
我想还是应该做的.
现在我的片子切不出来,可能跟这个也有关系吧!
作者:
guwei3550
时间:
2007-8-1 15:15
谢谢你的经验之谈,那灌注是在取才之前还是取下血管之后呢?具体方法是什么?可不可也把血管纵向剪开后固定呢?你是取的哪部分大血管啊?我现在不知道取哪部分的好一点.
作者:
Ariel
时间:
2007-8-1 15:50
取材之前灌流, 一般取胸主和腹主啊! 小鼠血管太小了,所以都要啊!我是研究动脉粥样硬化的,你的要看想观察的指标吧!
作者:
guwei3550
时间:
2007-8-2 16:39
是吧,谢谢你,我也是研究动脉硬化的,是糖尿病大鼠的,明天杀一部分,多谢指教.不过我的也做不了灌注,因为我们同学要同时做心,所以我决定把血管从中间剪开后再固定,可能比较好一点吧.都试试吧.以后咱们多多交流啊!我们学校没有做大血管的,我一点经验也没有,比较有挑战性
我的QQ:184983936,如果方便留下你的号码,多谢
欢迎光临 中华病理技术论坛 (http://bbs.zhbljs.com/bbs/)
Powered by Discuz! 6.0.0
我的QQ:184983936,如果方便留下你的号码,多谢