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标题: 免疫组化浓缩试剂的稀释方法?? [打印本页]

作者: 鱼越龙门 时间: 2007-8-9 21:55 标题: 免疫组化浓缩试剂的稀释方法??

请问:免疫组化浓缩试剂的稀释方法:用PBS缓冲液还是Tris缓冲液? 盼回复,多谢!!

作者: xiafeng 时间: 2007-8-10 09:10

PBS缓冲液还是Tris缓冲液,去认为都不是很合适啊，放置时间不久啊，建议用抗体稀释液！

作者: 鱼越龙门 时间: 2007-8-10 20:37

Sample Text多谢！现配现用可以么？抗体稀释液需要专门订购么？可以配置么？

作者: 喜力 时间: 2007-8-22 20:33

需要专门订
不过用的少的话就不值得了

用PBS可以保持7天。我依稀记得。

作者: 鱼越龙门 时间: 2007-9-2 01:01 标题: 回复 #3 鱼越龙门的帖子

slides are in sterilizion chamber (Et眉v) in one night
Depaarfinizatin, dehidratation
H2O2-methanol (3%) 25 minute
wash with distile water
wash with PBS
Microwave citrate buffer 750 w 5 dk
Microwave citrate buffer 500 w 5 dk
Microwave citrate buffer 350 w 5 dk
wash with PBS
primer antichor 1 hour
wash with PBS
seconder antichor 20 minute (biotinylated link, 1/50 dillusion)
wash with PBS
strepavidin 20 munite
wash with PBS
DAB 15 minute
distileted water
hematoksilien
flow-water
alchol-ksilol- shutting
我有些看不懂,有哪位破译!!!

作者: shanghainese 时间: 2007-9-2 09:21

你先用英汉字典一个字一个字翻译.
完后我帮你改.

作者: 鱼越龙门 时间: 2007-9-3 23:05

1.标本予热过夜
2.?
3.3%双氧水浸泡25分
4.蒸馏水洗
5.PBS液冲
6.微波炉高温 5分? 中火5分/低火5分?
9.PBS 液冲洗
10.加一抗孵育一小时
11.PBS 液冲洗
12.加二抗20分,(生物素酰化物,1:50稀释.)
13.PBS 液冲洗
14.?
15.PBS 液冲洗
16.显色15分    时间是否太长啊!!!
17.蒸馏水洗
18.苏木素复染
19自来水冲
20.酒精分化,封片
还有我用的一抗,为抗人NF-KAPPAB/P50抗原免疫组化多克窿抗体.二抗是否应选抗人的匹配,因为没有配套试剂盒,二抗用的是　：　Biotin-conjugated second          三抗是             KIT-0305-13
            　　　　Antibody(Goat anti-MS/Rb)                               Streptavidin-Peroxidase
是否影响结果？多谢！！

[ 本帖最后由鱼越龙门于 2007-9-3 23:06 编辑 ]

作者: shanghainese 时间: 2007-9-4 00:50

1.标本予热过夜                                     1.  切片放在灭菌柜里过夜
2.?  Depaarfinizatin, dehidratation          2.  应为Depaarfinizatin, rehidratation 脱蜡,复水
3.3%双氧水浸泡25分                            3.  3%双氧水浸泡25分 (只需 10 分钟)
4.蒸馏水洗                                           4.  蒸馏水洗
5.PBS液冲                                              5. PBS液冲
6.微波炉高温 5分? 中火5分/低火5分?       6. 微波炉高温 5分中火5分/低火5分
9.PBS 液冲洗                                        9. PBS 液冲洗
10.加一抗孵育一小时    10. 加一抗孵育一小时
11.PBS 液冲洗    11. PBS 液冲洗
12.加二抗20分,(生物素酰化物,1:50稀释.) 12. 加二抗20分, (生物素标记的, 1:50 稀释 ) (应为biotin conjugated/biotinylated)

13.PBS 液冲洗    13.  PBS 液冲洗
14.? strepavidin 20 munite                14.  应为streptavidin-HRP(辣根过氧化酶标记的链霉亲和素)

15.PBS 液冲洗    15.  PBS 液冲洗
16.显色15分    时间是否太长啊!!!       16.  DAB显色15分钟太长. 5分钟足够.
17.蒸馏水洗             17.  蒸馏水洗
18.苏木素复染 18.  苏木素复染
19自来水冲             19.  自来水冲
20.酒精分化,封片       20.  可能是脱水,封片

这个protocol 是从哪儿来的? 是从南非来的吗? 怪字连篇.
其次,我不会用这个protocol.
第三,你用的为抗人NF-KAPPAB/P50抗原免疫组化多克窿抗体. 你看看一抗是由哪个动物产生的. 二抗应选Biotin -conjugated 抗那个动物的抗体.

作者: 鱼越龙门 时间: 2007-9-4 21:38 标题: 多谢版主！

再次感谢！
我最近一个月作了几次试验，均失败了．因为这个标记在国内银屑病方面做得少，从外文文献看到图文并貌的文章．故选做此标记．因为没有经验，联系到作者，具体哪国我到没问及．是他回复的此方法．版主觉得不可行么？里面确实有的差别挺大～～
３％双氧水浸泡２５分钟与１０分钟有何区别？
我仔细看过NF-KAPPAB/P50的说明书，没提到是哪个动物来源的．我二抗怎么选呢？我科用的山羊／兔抗小鼠．
并且二抗，三抗均按１：１００稀释．用ＰＢＳ　液（包括一抗）稀释．有影响么？
希望尽快达到预期实验结果啊

作者: 鱼越龙门 时间: 2007-9-4 22:10

ＴＩＴＬＥ：Nature of cell kinetics in psoriaticepidermis

ＭＥＴＨＯＤＳＷ：: The study was performed in skin specimens of 25 patients
with psoriasis vulgaris and a control group of 10 individuals without
a skin disease. Biopsy specimens from lesional and normal skin were
analyzed by immunohistochemical method for expressions of Ki-67,
Bcl-2, terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin
nick-end labeling (TUNEL), tumor necrosis factor alpha (TNF-a) and
nuclear factor kappa B (NF-kB). In addition, densities of mast cell
infiltration were also investigated.

作者: shanghainese 时间: 2007-9-4 22:30

Nature of cell kinetics in psoriatic epidermis
Authors: Doger, Furuzan K.; Dikicioglu, Emel1; Ergin, Filiz2; Unal, Emel1; Sendur, Neslihan3; Uslu, Meltem3

Source: Journal of Cutaneous Pathology, Volume 34, Number 3, March 2007 , pp. 257-263(7)

Affiliations: 1: Department of Pathology 2: Department of Public Health 3: Department of Dermatology, School of Medicine, Adnan Menderes University, Aydin, Turkey

作者: shanghainese 时间: 2007-9-4 22:32

３％双氧水浸泡２５分钟与１０分钟有何区别不大。
NF-KAPPAB/P50哪里买的？

作者: szillp 时间: 2007-9-7 14:28

我可以帮你做免疫组化不过只能在北京

作者: 鱼越龙门 时间: 2007-9-9 21:23

就是这篇文章,试剂从麦新公司买的.

作者: 鱼越龙门 时间: 2007-9-9 21:27 标题: 回复 #13 szillp 的帖子

你好,你们曾用过,NF-KAPPAB/P50?
能不能提提宝贵意见,
在你那做,一张片子怎么计费呢(赎我冒昧问一下)

作者: nancy.carter 时间: 2007-9-10 22:48

大着胆子来看看,前辈们好厉害!看不懂!佩服!请问这免疫组化怎么学习啊?

作者: shanghainese 时间: 2007-9-11 11:51

引用:

原帖由 nancy.carter 于 2007-9-10 22:48 发表
大着胆子来看看,前辈们好厉害!看不懂!佩服!请问这免疫组化怎么学习啊?

这就要看您准备学到什么程度.
我以为从基础学起为好, 一步一步来,全面系统地学习.

作者: athena 时间: 2007-9-18 14:42 标题: 回复 #1 鱼越龙门的帖子

用PBS就可以

作者: shanghainese 时间: 2007-9-18 22:23

引用:

原帖由 athena 于 2007-9-18 14:42 发表
用PBS就可以

不行。

作者: hhuizhou 时间: 2008-1-8 18:44

PBS最好现配现用！

作者: encounter 时间: 2011-5-9 23:41

用稀释液省事，最好买工作液

作者: juefei 时间: 2011-5-10 22:09 标题: EDTA修复

请问老师EDTA修复后怎样不容易脱片？谢谢！

作者: promotion 时间: 2011-5-11 16:29

引用:

原帖由 juefei 于 2011-5-10 22:09 发表
请问老师EDTA修复后怎样不容易脱片？谢谢！

正电荷的载玻片，一般不会脱片的

作者: promotion 时间: 2011-5-11 16:31

引用:

原帖由 shanghainese 于 2007-9-18 22:23 发表

不行。

抗体稀释剂又不贵，50ml只要50元左右

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