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标题: 大鼠脑组织石蜡切片脆，求助！！ [打印本页]

作者: hemin2006255 时间: 2008-1-3 22:42 标题: 大鼠脑组织石蜡切片脆，求助！！

我作大鼠脑组织石蜡切片，预作免疫组化。第一次病理科常规脱水脱水（时间较短）切片完整，可是脱蜡水化过程中脱片（片甲不留！），第二次延长脱水时间，组织较脆，切片不完整。第三次将所有标本（在70％的酒精中浸泡达两个星期）全部进行脱水，取中间时间，因特殊原因浸蜡时间达5个半小时才包埋，片子根本切不出，石蜡切片中间组织部分直接是个洞。现在已没有标本了，急求有经验的大侠帮忙指点，现在是否还有补救措施，怎样才能制备出高质量的大鼠脑组织蜡块，急啊！！不胜感激！！，

作者: 痞子张 时间: 2008-1-4 14:21

各位老师啊
我也遇到这种情况

一个小鼠脑组织，他们用蔗糖固定过，会不会影响片子的质量啊
做免疫组化也是经常脱片，片甲不留！！！

作者: wyx418 时间: 2008-1-5 13:02

我今天也出现了和你一样的情况,切片中间就是洞,根本没组织了,请问你现在有补救方法的吗?我的QQ441600942,谢谢!

作者: hemin2006255 时间: 2008-1-5 14:27 标题: 星期五我同学作了下小鼠的，好像可以

星期五我同学作了下小鼠的，好像可以，但同时，大鼠的就不可以哦，见鬼

作者: lemon92008 时间: 2008-1-6 20:12

为什么啊，我的也是啊，怎么会这样啊，我都做了快半年了，现在还是不行啊，你们的有没有解决啊

作者: wangze8229 时间: 2008-1-7 10:35

试试缩短一下二甲苯的时间

作者: 果然 时间: 2008-1-10 16:30 标题: 我发表点浅见

动物试验中的大鼠脑组织要达到足够固定时间（4小时左右），固定后脱水很重要，坚决不能时间长要短些（尤其是在无水里），还有就是侵蜡时间一定不能长，也要短（1.30分左右就行），切片后烤片要时间长一点15分以上，其实要说还有很多，这些都是基本的要点，还有温度的控制。。在有问题时再探讨吧

作者: 痞子张 时间: 2008-1-11 11:19

引用:

原帖由果然于 2008-1-10 16:30 发表
动物试验中的大鼠脑组织要达到足够固定时间（4小时左右），固定后脱水很重要，坚决不能时间长要短些（尤其是在无水里），还有就是侵蜡时间一定不能长，也要短（1.30分左右就行），切片后烤片要时间长一点15分以上，其 ...

这位老师
您能不能具体给个步骤啊
我们这些新手好像走了很多弯路啊

作者: gaolice 时间: 2008-1-22 13:55

我在做小鼠的脑切片，请教一下，常规脱水时间不是是长了些，我用4％多聚甲醛－0.1M的PBS固定的

作者: Pulidia 时间: 2008-1-26 12:38

关于楼主所说的问题，以前我也曾经遇到过。我做的是大鼠脑干的石蜡切片，只就我的经验简单提点意见吧，不知道能否有所帮助。
既然楼主说用第一次病理科常规脱水透明切片完整（我不是病理科的，所以不太清楚病理科的常规脱水透明是大概多长时间），那么，可能可以以此方法进行脱水透明包埋。我只建议在切完片后尽量多烤一段时间切片（烤箱温度视你所用包埋用石蜡的熔点而定，烤箱温度和那个温度差不多或者稍高，烤片至少>24hr）。然后在做免疫组化之前在60℃左右烤片半小时，这样可以让蜡熔解，使切片和玻片贴的更牢靠。
楼主可以试试看，我这么做的，感觉好了很多。

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