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标题: 求助，切片质量问题 [打印本页]

作者: chenjing 时间: 2008-3-4 10:46 标题: 求助，切片质量问题

我最近制作的一批切片上，总是有一些模糊的地方，不能与其他部分聚焦在同一平面上，这些模糊的地方一小团一小团，零散分布在切片上，单独调焦可以看清楚，就是不能与其他部分同时看清楚。
请教这是什么问题？

作者: lassa 时间: 2008-3-4 10:54

上图片再说

作者: chenjing 时间: 2008-3-4 13:10 标题: 图片

[attach]950[/attach]

作者: chenjing 时间: 2008-3-4 13:13 标题: 图片2

这是第二张图

作者: chenjing 时间: 2008-3-4 13:15 标题: 图片继续

[attach]952[/attach]

作者: chenjing 时间: 2008-3-4 13:16

[attach]953[/attach]

作者: chenjing 时间: 2008-3-4 13:18

[attach]954[/attach]

作者: chenjing 时间: 2008-3-4 13:20

[attach]955[/attach]

作者: chenjing 时间: 2008-3-4 13:23

图上黑线所画部分模糊，不知道怎么回事，恳求高手给予指教，跪谢！

作者: ranzhiyuan 时间: 2008-3-4 20:43

我以前也出现过类似的情况，我把脱水和透明的液体都重新换了一遍，这种情况就没有了，具体是什么原因，我也不知道。

作者: chenjing 时间: 2008-3-5 08:39

谢谢，我试一试

作者: JD1956 时间: 2008-7-12 01:00 标题: 回贴

我认为两种情况下会出现这种现象:
1 封片时有水分.
2 染色过程中脱蜡不干净.(可能性大)

作者: ChenRong 时间: 2008-7-12 17:07

很明显是漂片机的水温低了点，在加个1度到3度试试。
原因在于水温低了片子没有摊平，有凹凸不平的地方，在急速的一烤就留下了这个样小凹凸，染色后就不平了。

作者: ldl19820425 时间: 2008-7-30 17:50

有时同一张片子部分不在同一平面上也会出现这种模糊的情况。

作者: flyingfish312 时间: 2008-7-30 18:54

前一步骤酒精和二甲苯里面含水分过多！

作者: chengxishun 时间: 2008-8-10 18:57

第一：脱蜡不干净
第二：片子没贴平

作者: 米老鼠888 时间: 2008-8-11 05:13 标题: 漂水

您好：
因为是部分不清，所以考虑是冲水时间不够，另外可能是脱水不太好，不知您用分化时间的长短，可以短一些试试。

作者: 郑 时间: 2008-8-27 22:58

染色时蜡未脱尽.

作者: 闲云 时间: 2008-8-28 15:51

同意12#的。

作者: 淡若水 时间: 2008-9-2 21:09

“这些模糊的地方一小团一小团，零散分布在切片上，单独调焦可以看清楚，就是不能与其他部分同时看清楚。”
显然片子的这两种地方的染色都是没有问题的，所以和含有水分和脱蜡不好应该是关系不大。还是应该是版主的意见，就是蜡片没有展平。染好后，片子的各部分不在一个平面上。

作者: 琳子 时间: 2009-2-15 09:20

无水不纯了，我们也出现过这样的情况

作者: rongye_xj 时间: 2009-2-18 21:25

水中捞片时如果不再一个平面就是这种情况，组织和玻片之间有气泡时也会出现这样。

作者: Dcat 时间: 2009-2-19 21:22

引用:

原帖由 chenjing 于 2008-3-4 13:16 发表
953

这个心脏是怎么做出来的???
能把脱水过程告诉我么????

作者: gemzaa 时间: 2009-3-30 10:30

我以前也遇到过，以为是脱蜡没脱干净后重切就没有了，可能组织没有固定透。

[ 本帖最后由 gemzaa 于 2009-3-30 10:32 编辑 ]

作者: ylzhao 时间: 2009-4-1 22:31

我也遇到过类似的问题,把脱蜡以后的乙醇,换新的试一试.可能是乙醇中含二甲苯太多.

作者: cz古典古 时间: 2009-4-6 21:30

分化不好，过后的透明就不好

作者: 元始 时间: 2009-4-9 20:39

出现过这种情况，谢了

作者: 梅花 时间: 2009-4-18 22:12

染色后脱水透明不够

作者: 梅花 时间: 2009-5-19 21:27

可能是染色完脱水不彻底

作者: guo_xiao9 时间: 2009-9-1 13:54

有可能是脱蜡不尽吧，也有可能是片不没展平。也有可能是染气后脱水不尽。。。
很多原因。。

作者: 痞子张 时间: 2009-11-15 19:56

引用:

原帖由 chengxishun 于 2008-8-10 18:57 发表
第一：脱蜡不干净
第二：片子没贴平

同意

作者: zhaojian 时间: 2009-11-19 12:18

支持版主意见！

作者: 风铃花 时间: 2009-12-3 22:31

脱蜡后二甲苯清洗不干净的部位容易出现这种情况，更换梯度酒精后可改变

作者: gpnasa 时间: 2010-1-7 15:36 标题: 是进入漂片机是，蜡片未展平。或由于染色后吹风机吹干所致

作者: 徐陶陶 时间: 2010-1-17 20:49 标题: 请教：为什么我在切直肠腺瘤或甲状腺标本时，一放到水中展片就容易散？

请问我在切直肠腺瘤或甲状腺标本时，一放到水中展片就散开了?

作者: 熊成勇 时间: 2010-1-18 07:38 标题: 回复 8# 的帖子

不在同一平面上的那些部位，细胞核染色是否清，如果清晰，那就是你考片太急，等片子上的水分干掉以后在考。

作者: zhaoying241 时间: 2010-2-22 11:19 标题: 几种情况可能造成标本呈现的问题

几种情况可能造成标本呈现的问题

1. 切片展片时，切片下面存有肉眼不可见的气泡。
2. 切片裱片时，切片不平整所致。
3. 烤片时，切片所带的水份较多，烤片温度较高，致使切片下面出现微小气泡。
4. 染色时，梯度酒精下行过快，可引起切片膨胀不均，致使标本出现局部浮起。

这是学生们在实际技术操作中出现图片问题的原因，仅供参考。

作者: Tony 时间: 2010-2-22 12:40

可能是封固剂树脂局部太厚,不均匀引起的

作者: Tony 时间: 2010-2-22 12:41

可能是封固剂树脂局部太厚,不均匀引起的

作者: Tony 时间: 2010-2-22 12:42

可能是封固剂树脂局部太厚,不均匀引起的

作者: Tony 时间: 2010-2-22 12:44

可能是封固剂树脂局部太厚,不均匀引起的

作者: Tony 时间: 2010-2-22 12:45

可能是封固剂树脂局部太厚,不均匀引起的

作者: 博太科技 时间: 2010-2-22 16:57

可能是脱水试剂和二甲苯浓度不够造成的，说明脱水机虑液时间过短，把低浓度试剂的水份带到了下一缸。建议调整虑液时间

作者: Tony 时间: 2010-2-22 18:00

可能是封固剂树脂不均匀

作者: 朱峰 时间: 2010-2-26 10:54

可能是脱水透明问题

作者: feiyanzuobi 时间: 2010-3-15 23:37

人油

作者: 20417003 时间: 2010-4-27 11:32

展片时未完全展平，或者蜡片下边有气泡这两种可能比较大。

作者: 20417003 时间: 2010-4-27 11:33

展平不够完全或蜡片下有气泡，这两种可能较大。

作者: 20417003 时间: 2010-4-27 11:34 标题: 两种可能

展平不够完全或蜡片下有气泡，这两种可能较大。

作者: wosniqd 时间: 2010-4-28 21:31

是否和切片机跳刀有关？

作者: 轻松 时间: 2010-5-3 10:30

没有

作者: 专心工作 时间: 2010-5-27 22:17

和展片水温过低有关

作者: qius 时间: 2010-5-28 14:53

切片是注意摇速均匀，不宜过快，也不能太慢

作者: SW金元宝 时间: 2010-9-5 20:44 标题: 模糊不清原因

模糊不清原因主要1：捞片后水没有控干，烤片太早所以出现气泡，很微小的气泡一般肉眼不容易看到的，染色后会出现这种情况
2：切片脱蜡时间适当延长，也有可能是脱蜡不干净造成的
3：切片透明时酒精常观察着点，不行就赶快换

作者: linzhihua 时间: 2010-12-7 20:01

引用:

原帖由 风铃花 于 2009-12-3 22:31 发表
脱蜡后二甲苯清洗不干净的部位容易出现这种情况，更换梯度酒精后可改变

同意哦。

作者: hobwxh 时间: 2011-1-16 11:13

作者: 鱼的眼泪 时间: 2011-1-16 20:15

作者: 强子 时间: 2011-4-1 17:33

学习了，我以前也有过，现在好像不见了

作者: 强子 时间: 2011-4-15 11:01

几种情况可能造成标本呈现的问题
几种情况可能造成标本呈现的问题

1. 切片展片时，切片下面存有肉眼不可见的气泡。
2. 切片裱片时，切片不平整所致。
3. 烤片时，切片所带的水份较多，烤片温度较高，致使切片下面出现微小气泡。
4. 染色时，梯度酒精下行过快，可引起切片膨胀不均，致使标本出现局部浮起。

作者: 侠客 时间: 2011-9-28 00:38

本人认为，是封片胶滴多了，没有压平引起的。下面我觉得不是很有可能！
1. 切片展片时，切片下面存有肉眼不可见的气泡。（如果有切片考片后由于石蜡的溶解会跟着消失和充分展平的）
2. 切片裱片时，切片不平整所致。（会出现切片厚薄不均，在此片上未见到）
3. 烤片时，切片所带的水份较多，烤片温度较高，致使切片下面出现微小气泡。（考片温度一般最高也就70度，不至于）
以上均为个人愚见仅供参考。

作者: ddyyff559 时间: 2011-10-13 10:45

脱水不净

作者: huaxihuaxihuaxi 时间: 2011-11-17 22:47

有可能是你的片子摊在水中时有部分有皱褶，组织不在同一水平线上。如果片子漂在水中都平了，那出来的片子就不用调了。我也遇到过这种情况，但不知我们是不是同一种情况

作者: 13581556487 时间: 2012-1-14 18:38 标题: 回复 1# 的帖子

我考虑是综合因素的原因，首先是脱水机里液体其次是后期切片完后的二甲苯脱蜡的毛病。我以前也出现过。

后来就慢慢好了。大约700-800个蜡块就换一道酒精，这个尺度。后期脱蜡的二甲苯大约500个蜡块换一道，这个时间的长一点，脱蜡总时间在20分钟以上。再者切片尽量要保证平整，可以调到2um的厚度往刀口上吹气，这样片子的厚度大约在3-4um之间，主要是平整，也保证了你说的那种情况的发生了。

我的意见仅供参考。谢谢

作者: Tony 时间: 2012-1-15 21:36

this called uneven,most related to the microtome old parts

作者: zli 时间: 2012-4-19 10:11

这个现象我也考虑脱水和透明的原因

作者: zli 时间: 2012-4-19 10:12

这个现象我也考虑脱水和透明的原因

作者: zli 时间: 2012-4-19 10:12 标题: 1

这个现象我也考虑脱水和透明的原因

作者: gaoyanghp5972 时间: 2012-5-10 21:32

我要权限

作者: chaleying 时间: 2012-7-5 17:26

看起来是水汽，可能是透明剂有水或者不纯净造成的，要时常换。也可能是过无水酒精时候没有把片吹干就透明了。

作者: 鸭子 时间: 2012-7-22 14:11

我觉得是摊片的水温，不一平面

作者: willfirm 时间: 2012-7-30 13:02 标题: 继续关注此贴

作者: 郭建红 时间: 2012-7-31 12:35

酒精不纯，带上水哦了

作者: lijinmei 时间: 2012-9-20 20:14

我觉得是带水了,后面的酒精不纯了

作者: 小刚 时间: 2013-1-22 09:57

展片不够或脱蜡不足

作者: KINGDXY2008 时间: 2013-4-9 20:37

我最近也有这情况啊

作者: KINGDXY2008 时间: 2013-4-9 20:38

我最近也出现这情况拉

作者: KINGDXY2008 时间: 2013-4-9 20:39

引用:

原帖由 ChenRong 于 2008-7-12 17:07 发表
很明显是漂片机的水温低了点，在加个1度到3度试试。
原因在于水温低了片子没有摊平，有凹凸不平的地方，在急速的一烤就留下了这个样小凹凸，染色后就不平了。

同意这个说法

作者: janseone 时间: 2013-4-24 21:16

注意室温，二甲苯纯度，尽量二甲苯时间长一些，你试试。

个人意见，仅供参考！

作者: 飞真真 时间: 2013-6-7 11:32

领教了。

作者: jhyjhy2013 时间: 2013-6-13 17:27

脱蜡不彻底可能染色不佳；如收缩不匀可见裂隙，个人认为应该是展片不平整所致。所以重切后现象消失。

作者: 派索 时间: 2013-12-19 00:19

引用:

原帖由 chaleying 于 2012-7-5 17:26 发表
看起来是水汽，可能是透明剂有水或者不纯净造成的，要时常换。也可能是过无水酒精时候没有把片吹干就透明了。

靠谱！

组织在染色过程中会浸润不少水分，（伊红）染色后的梯度酒精就是为了脱干净水分，假如水分没完全控干而封片，水分挥发变成雾气，但被盖玻片和树胶封死在玻片内无法挥发从而产生如图的现象。

脱蜡不干净的不符合本实例，脱蜡不干净往往是整个切片不能上色，而不是本实例的片花。

至于说因为捞片不平而在显微镜下不在同一个焦点上不成立，因为相对小的平面上在盖玻片和树胶的作用力下，组织会完全压平压实了，不存在不在同一个平面上的可能，最多有可能重叠（但看图片不是组织重叠现象）。

作者: junyi4444 时间: 2014-3-18 21:59

继续关注此贴

作者: wjq520lyl 时间: 2014-5-23 12:10

我也遇到过，换了液体然后多洗洗，就没有了。仅供参考，我才干这行1年多点。

作者: 仙亦然 时间: 2014-5-25 08:40

学习了

作者: zenglihua 时间: 2014-5-26 13:46

很想知道改进结果如何，跟进，版主记得把后面的情况跟我们一起分享一下。

作者: blk8373 时间: 2015-2-13 08:51

我觉得大家讨论的问题很好解决的：
1.更换染色的脱水无水乙醇，将切片重新脱水，现象消失，说明原因是脱水不彻底，产生雾气所致！（本人也倾向于这一点）。

2.若上述操作无效果，调节摊片水温，我们这里是43度，重新切片，多切几张，看看效果如何！

实践出真理！

作者: 郑红涛 时间: 2015-5-5 19:43

刚开始切片的时候，我也是这样的问题，“厚薄不均”。主任说是手法的问题，过了一段时间就好了。

作者: donyln 时间: 2015-9-5 17:02

我提几个我的观点参考下：1.玻片凹凸不平
2.组织毡片时有气泡

作者: lijiahua 时间: 2015-9-17 15:54

我也遇见过这样的问题，认为是组织块局部与载玻片粘贴不牢固，染色过程中，组织块局部脱离载玻片，解决办法是，在盖盖玻片前用电吹风轻轻吹干，可以解决这个现象。

作者: 张丽华 时间: 2015-12-11 13:54

学习了！

作者: zphoenix 时间: 2022-7-28 18:29

脱水不彻底？

作者: bub1129 时间: 2022-8-9 22:09

学习了

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