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标题: 各位老师，同学，我所切出的组织样常有裂隙，不知怎么回事？ [打印本页]

作者: 熊出没注意 时间: 2008-4-8 21:48 标题: 各位老师，同学，我所切出的组织样常有裂隙，不知怎么回事？

各位老师，同学，我所切出的组织样常有裂隙，不知怎么回事？另外包埋时我感觉我的样有点硬，不知是否正常。
关于我实验的具体情况如下：
1.我的组织样是日龄不同的鹅的肠道，每轮约同时做30个不同日龄的鹅样。有三分之二能切得很好，连片，有一部分组织样有大小不一的裂隙，让我非常头痛！
2.脱水梯度50 60 70 85 各2h 95两次各1h 无水两次各30min 1：1 30min 二甲苯分别为15min10min
3.包埋 52-54石蜡两次各30min 56-58 石蜡两次各30min 用石蜡与蜂蜡混合的蜡包埋，浸蜡及包埋温度为60°
一般包埋时都能在短时间内完成，很顺利。
4.包埋后将蜡块在室温下保存（约10度到15度）一周后，用莱卡一次性刀片切片。
问题1. 为什么同一批的大部分样都能切的特别好而有部分片子组织样有大小不一的裂隙？
2.包埋时用镊子夹取组织样，感觉样硬是否正常？
3.烤片后组织样角翘起来是怎么回事？
4.我切出的片子准备过两周再染色，目前采用的烤片办法是，将切好的片子在恒温烘箱内37度烤片过夜，以便长期保存，然后在染色前再在烘箱内60度烤10分钟脱蜡（方法是在期刊网上查的）。这种办法行吗？

作者: KETTY 时间: 2008-4-8 22:39

1.产生裂隙可能与标本取材的厚度有关．
２.切好的片子在烤箱内过夜，时间过长．
　　镊子夹取组织感觉发硬可能是脱水过了，也可能是二甲苯过了
３.切片前最好把蜡块放在冰块上小冻一会再切．
４.烤片以后片子角翘可能是切片有点厚．
谨供参考！

作者: 熊出没注意 时间: 2008-4-9 10:00 标题: 回复 1# 的帖子

非常谢谢ketty的留言。
我昨天想了一下，可能我透明时间还是长，我准备把二甲苯时间改为各10分钟。浸蜡时间改为4个蜡杯各20分钟
我的标本为肠道，不厚，也就一两毫米，各日龄肠段厚度差异不大。所以我想和样的关系不大。
我是切5微米。40度展片，37度烤片过夜。
对了，我的样在95二里过夜，约10-12小时。
上次实验在入二甲苯前，我把样从包埋盒中拿出来用滤纸擦，感觉脱水后样并没有变硬变脆。所以我感觉还是二甲苯时间长了，不知各位觉得是不是。

作者: 熊出没注意 时间: 2008-4-9 10:04 标题: 脱水透明时间长不长啊？

我看了许多资料，几乎所有的禽类组织脱水透明时间都比我的长，怎么我的样有的就切出来效果不好呢？

作者: 熊出没注意 时间: 2008-4-9 19:39 标题: 回复 3# 的帖子

大家再帮我分析一下好吗？谢谢各位。
问题1. 为什么同一批的大部分样都能切的特别好而有部分片子组织样有大小不一的裂隙？
2.包埋时用镊子夹取组织样，感觉样硬是否正常？
3.烤片后组织样角翘起来是怎么回事？
4.我切出的片子准备过两周再染色，目前采用的烤片办法是，将切好的片子在恒温烘箱内37度烤片过夜，以便长期保存，然后在染色前再在烘箱内60度烤10分钟脱蜡（方法是在期刊网上查的）。这种办法行吗？
ketty说时间过夜长，所以今天我切完片准备放十小时左右。

作者: 文艺峰 时间: 2008-4-29 23:12 标题: 提两句不成熟的看法

1：不知道脱水时间过短会不会也有影响，我脱水中二甲笨是两次各30分钟。
移刀了没有？一块刀片也不能无止境的切下去。
如果组织过硬，调小到4薇米试试。反正是实验，多调调。
2：在我印象里，组织要硬而韧，也不知道程是何为最佳。
3：她说的翘是不是指组织和玻片有部份脱离？
4：我切出来一般都直接60+度脱蜡染色，没用过你的保存方法，推想起来应该可行，你自己平时染色没出现问题的话不就得了。

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