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标题: 求助：掉片 [打印本页]

作者: chh810729 时间: 2008-9-4 22:09 标题: 求助：掉片

请问各位高手，烤片时烤箱的温度是和包埋蜡的最高熔点一致就行还是得高于最高熔点？我做的时候是和包埋蜡的最高熔点一致的，昨天做的片子基本上没有掉片现象，今天的片子掉片现象比较严重。谢谢！

作者: 淡若水 时间: 2008-9-5 19:44

我的经验是烤片的温度能让片子上的蜡能融化就行，一般略高于包埋蜡的熔点。烤片时间最好半小时以上。
还有就是你返蓝採取的是稀氨水还是自来水？自来水返蓝一般不会掉片。
如果不是这些因素，那就要看你脱水的程序有没有什么问题了。
还有一个问题就是你的玻片，是否清洁？如果玻片不清洁，也有可能掉片的。

[ 本帖最后由淡若水于 2008-9-5 19:45 编辑 ]

作者: chh810729 时间: 2008-9-11 08:00

谢谢淡若水的回复，还想请教您几个问题：1.我烤片都过夜了（蜡的熔点是58-60度，考片的温度是60度），只有组织周围一圈的蜡融化了，我也听别人说过烤完片子后组织上基本上没什么蜡了，我把温度调高到62度，再过夜烤，片子上的蜡还是老样子。2.我返蓝用自来水小水冲洗的，我想问下您是用自来水冲洗还是自来水浸泡？3.我用的是新的载玻片捞片的，是不是新的片子也需要处理一下？4.脱水的程序是按师兄以前的方法做的，应该是没什么问题。谢谢！

作者: 郑 时间: 2008-10-3 01:49

你要从根子上找原因的话就是组织处理的问题，特别是要注意固定，经过处理的组织如果收缩太硬的话就容易掉片。

作者: 淡若水 时间: 2008-10-3 05:15

4楼说的也是一个原因，快速石蜡切片，非常容易掉片，就是因为制片过程中脱水没有普通石蜡切片的脱水好。至于你的组织块是不是太硬，你自己在切片时感觉容不容易切就知道了，太硬，切片时，是切不出完整的薄的片子的。
你说的烤片的情况，应该是没有问题的。
不要以为流水冲洗，就真的是用自来水来冲洗，组织贴附在载玻片上，又没有粘附剂，哪儿能经受得起水的不断冲刷？要求流水，其实质不过就是不断的更换新的自来水而已。我是用缸接自来水洗片的，遇到容易掉片的组织时，动作更要小心轻柔。返蓝时，只要片子上的苏木素洗干净了，就可以浸泡在自来水里，（其间可以根据情况，再更换几次自来水），让组织自然返蓝，浸泡的时间，以细胞核已经变成了清楚的蓝色了，就可以了。可以十几分钟，也可以半个小时。也可以在显微镜下观察分色和返蓝的效果，时间长了，你自己就知道多长时间合适了。以前老师傅说的越久越好，说经过这样处理后，片子储存的时间不管多久都不会变色，不过，我试的结果，泡上3－4个小时，好像苏木素的颜色也会变淡。
至于载玻片的问题，新玻片肯定要清洗一遍，除非你买的是免洗玻片。从节约成本来看，其实大可不必用免洗玻片。我的师傅，当时还是用的专门配置的玻片清洗液，有毒，也麻烦。后来看见别人直接用洗涤剂浸泡，我也改用家用洗涤剂，浸泡24小时后再用自来水洗净洗涤剂，有条件的话，也可以用95％酒精再浸泡一次，烘干备用。我现在连酒精那步都免了。效果也不错。不过，玻片放到洗涤剂里，得一张一张的丢，如果一盒一盒的倒，大部分玻片中间是进不去洗涤剂的。不久前，看见杂志上一篇介绍洗涤盖玻片的文章，我按文章介绍做，结果，根本洗不干净，后来我改成一张一张的将盖玻片丢进盐酸酒精。才解决了这个问题。
现在开展了免疫组化，染片过程中，步骤更加复杂，更容易掉片，片子的清洁更重要。
遇到怎么也要掉片的组织，我是用在载玻片上涂上薄薄的一层甘油蛋白来解决，再不行，我就涂乳白胶了，只是后者本身也会被伊红淡染，片子没有那么美观了。
如果是做免疫组化，那就应该用专门的粘附剂了，这方面最近的杂志有文章介绍这方面的经验。因为我的医院小，没有开展这项工作，没有体会，如果你有需要，看有没有这方面的高手能解答你的问题。当然，你也可以去查杂志，我是在《诊断病理学杂志》和《临床与实验病理学杂志》上看到有这样的文章的。

[ 本帖最后由淡若水于 2008-10-3 06:34 编辑 ]

作者: chh810729 时间: 2008-10-14 18:36

非常感谢淡若水老师的耐心指导，谢谢您！

作者: gbyou 时间: 2008-10-17 12:01

有用防脱片液的，你可以试试啊。

作者: sujianjun 时间: 2008-10-17 13:29

不知切片用来漂片的是用的什么水哪，如果是自来水，那你就换成蒸馏水，或纯净水，试一下，看看怎么样。

作者: 不爱飞的鸟 时间: 2008-10-20 15:06 标题: 回复 1# 的帖子

我科使用切片石蜡是58-60的烤片65度蜡融化后15分钟基本不会掉片
如果还掉片就要检查其他原因了

作者: 小文dd 时间: 2008-10-21 20:39

上面的老师说的对你玻片换下免洗的看下

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