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标题: 急~求助HE染色细胞核红色？？？ [打印本页]

作者: ysj198 时间: 2009-3-2 21:46 标题: 急~求助HE染色细胞核红色？？？

片子出来，核总是紫红色，伊红很浅，组织模糊，尤其是小标本，胃镜类的，细胞核总是染不上色，模模糊糊的，以下是我的HE染色步骤：请教各位老师，看看哪出的问题？？
切片后烤片90度3小时，松节油两缸，共30分钟，梯度酒精共四缸，每缸五分钟，水洗，觉得酒精冲干净了，也就10S左右，苏木素（新换的）4分种，水洗（一遍），1%盐酸酒精2S,水洗（一遍），1%氨水1分钟，水洗（一遍），伊红3-5S,入水，95%酒精，半分钟，无水酒精，一分钟，松节油，一分钟，封片。
片子从氨水出来的时候还是很蓝的（显微镜下），但是就是进了伊红后出来，细胞核就成了红色的了，以前的伊红染3分钟，细胞核一样很红。（我们的苏木素和伊红都是进的试剂公司的，没有自己配的）
那位老师帮忙解答一下，困扰很久了，试了很多方法，都不行，以前不是这样，后来大概小半年吧，片子出来都是这样了，还有一个就是，我们伊红后面的酒精可能不是很纯，尤其是75，95的，基本上浓度都不是很准。
下次上来的时候我上传点图片，大家帮忙看下吧

作者: 黄树叶 时间: 2009-6-2 14:05

“切片后烤片90度3小时，” ？？？

“片子从氨水出来的时候还是很蓝的（显微镜下），但是就是进了伊红后出来，细胞核就成了红色的了，以前的伊红染3分钟，细胞核一样很红” ————你用PH试纸测一下酸碱度？
排除染色系统的原因外就是组织的处理问题了。
希望你能尽快找出原因。

作者: fanxing6969 时间: 2009-6-7 19:32

你的组织可能出了问题，烤片温度是不是过高？你可将温度降至60-65度

作者: dingwei 时间: 2009-6-8 19:48

1、烤片温度过高。一般60-65度半小时至1小时就可以了。
2、苏木素4分钟我不知道是否够，分化后应该用显微镜看一下，核着色深浅是否合适。
3、用流水或温水蓝化。用氨水蓝化，尽管速度好象很快，但改变了切片的PH值，所以依红很难上色，时间一长，核也被依红染上了。
4、依红染5-10秒

作者: 水瓶康康 时间: 2009-6-29 20:51

我们烤片72度烤台上10分钟就可以了,苏木素每日用前过滤,伊红要常测下PH值,尤其是氨水返兰后冲洗不净的话,会很大程度上影响伊红的酸碱度,从而使其不易对组织着色

作者: pangmin777 时间: 2009-11-28 10:23

我们烤片是62度30分钟.
我觉得经过氨水让PH值上升到胞浆等电点之上了,显酸性电离,会让细胞核也着色,使细胞核和胞浆变得难以区分!!

作者: ChenRong 时间: 2009-11-29 09:52

同意楼上几位的观点“改变了切片的PH值”，你还是试试直接水洗吧

作者: 孟红梅 时间: 2009-11-30 10:50

不用氨水冲洗，改为自来水冲洗试一下，如果还是不行的话，就应该是伊红的问题了，测一下伊红的PH值，应该在3.6-4.7之间，如果值小于3.3（细胞核染色体的等电点，PI=3.3),染色体发生碱式电离带正电荷，/////////////////////////////而被伊红染色，使核浆不分

作者: liwenjun3246 时间: 2011-5-22 23:00

我的经验是酸化后不用氨水冲洗改用自来水冲洗，然后在30-40度的温水里蓝化3-5分钟就可以了，这样也不影响以后的伊红染色液PH。

作者: liwenjun3246 时间: 2011-5-22 23:01

我的经验是酸化后不用氨水冲洗改用自来水冲洗，然后在30-40度的温水里蓝化3-5分钟就可以了，这样也不影响以后的伊红染色液PH。

作者: gao314159 时间: 2011-5-23 13:40

我们是烤片70度10分钟，返蓝用的饱和碳酸锂，水洗一定要充分，不能残留上一步的试液

作者: 九日 时间: 2011-5-23 14:17

我也用碳酸锂，再伊红染。结果与不用碳酸锂的要漂亮。

伊红不上红，检查一下啊伊红的配制吧。

作者: yizhonghk 时间: 2015-6-24 10:14

学习了

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