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标题: 请教：小鼠肝组织石蜡切片发脆怎么办？ [打印本页]

作者: glypican 时间: 2005-5-9 22:24 标题: 请教：小鼠肝组织石蜡切片发脆怎么办？

组织块切大约7mmX3mmX3mm大
用4%多聚甲醛4度固定20小时左右(多长时间合适？在室温还是4度固定？）
1XPBS洗
70%乙醇4度脱水过夜
组织块修成5mmX3mmX2mm大后，
95%乙醇 15min；无水乙醇 15min×2。（时间/浓度梯度是否合适？）
1/2乙醇 1/2 二甲苯，15min；二甲苯 2min。
1/2 二甲苯 1/2 石蜡（52-54oC）30min；石蜡 1.5 hr；石蜡 2.5 hr。(时间是否合适？）
切片厚度6um，
同时处理几个组织块，总有些很脆，切不出片子。
切出的片子展片贴片后，37度烘8小时左右。做HE染色时掉片又是怎么回事？
谢谢各位前辈指教！

作者: 闲云 时间: 2005-5-10 15:40 标题: 请教：小鼠肝组织石蜡切片发脆怎么办？

脱水不过夜看看！脱水过程中你们还需要休整吗？无水乙醇是2小时还是2分钟？怎么还有步1/2乙醇，看不懂！烤片可以62度烤2-3小时，如果不做IHC，65度烤也可以，应该不会掉片了。

作者: glypican 时间: 2005-5-10 18:19 标题: 请教：小鼠肝组织石蜡切片发脆怎么办？

[这个贴子最后由glypican在 2005/05/10 06:22pm 编辑]

组织块取下来固定后不马上切片的话，我们是在70%乙醇中保存的。（有什么问题吗？）
脱水时，无水乙醇是15min，两次
然后换乙醇和二甲苯的1:1混合物 15min，再换二甲苯透明2min
另外：我们用的蜡熔点是52-54度左右的，62度烤片不就化了吗？用普通的烘箱可以烤片吗？
大家帮忙看看整个过程有什么要改进的？

作者: 闲云 时间: 2005-5-11 14:25 标题: 请教：小鼠肝组织石蜡切片发脆怎么办？

然后换乙醇和二甲苯的1:1混合物 15min，你们还有这一步，我没这样弄过！烤片可以比蜡的温度高一些，组织不会化的。别弄的那么复杂。

作者: zmhsky 时间: 2009-6-16 22:06

小鼠肝组织石蜡切片脱水时间70%乙醇80%乙醇95%乙醇各2小时无水乙醇 1小时×2 二甲苯，30min；二甲苯 15min 石蜡（52-54oC）30min；石蜡 1.5 hr；石蜡 2.5 hr

作者: SNA 时间: 2009-6-17 09:22

自己的经验，脱水效果很好：

小鼠肝脏组织脱水时间：

65％乙醇 1.5h

75%乙醇 1.5h

85%乙醇 30 min

95%乙醇Ⅰ 15min

95％乙醇Ⅱ 20 min

无水乙醇Ⅰ 5 min

无水乙醇Ⅱ 8 min

二甲苯Ⅰ 5 min

二甲苯Ⅱ 5min

蜡Ⅰ 3min

蜡Ⅱ 3min

蜡Ⅲ 3min

作者: ding76340646 时间: 2009-7-27 14:01

把做好的蜡块放在装有生理盐水的肾形盘里放在冷苔上冰下看怎么样

作者: 刘振伟 时间: 2009-9-3 13:46

切片时可以调整切片厚度，对于肝脏薄些比厚些要好切，可以试试

作者: jiaguotao 时间: 2009-12-9 10:05

引用:

原帖由 SNA 于 2009-6-17 09:22 发表
自己的经验，脱水效果很好：小鼠肝脏组织脱水时间： 65％乙醇 1.5h75%乙醇 1.5h85%乙醇 30 min95%乙醇Ⅰ 15min95％乙醇Ⅱ 20 min无水乙醇Ⅰ 5 min无水乙醇Ⅱ 8 min二甲苯Ⅰ ...

比较实用

作者: KETTY 时间: 2009-12-10 21:52

这么小的组织常规处理就可以，肝脏组织取材可以稍微厚一点。

作者: 勤知 时间: 2010-2-9 16:29

我觉得应该缩短脱水时间，也就是无水乙醇的时间以及二甲苯透明的时间

作者: feiyanzuobi 时间: 2010-2-9 20:23

用手温热一下，就好点

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