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标题: 各位专家、老师帮忙瞅一眼，谢谢您嘞！！ [打印本页]
作者: daniel    时间: 2009-7-6 16:22     标题: 各位专家、老师帮忙瞅一眼，谢谢您嘞！！

各位老师：
      小学生科研有一块是做冰冻免疫组化的，做的不成功！最最重要的是，我不知道自己做的有没有阳性结果！详见附图（鸡的胸腺组织）
如果有老师懂这一块的话，希望能得到您的指点！

[ 本帖最后由 daniel 于 2009-7-6 16:41 编辑 ]
作者: daniel    时间: 2009-7-6 16:24     标题: 补充!

如果不是阳性结果的话，我能听到您的建议吗？
下面是一些详细的资料
各位老师：
      小学生科研有一块是做冰冻免疫组化的，做的不成功！最最重要的是，我不知道自己做的有没有阳性结果！如果有老师懂这一块的话，希望能得到您的指点！
      实验动物是鸡，目的蛋白是T淋巴细胞细胞膜上的一类跨膜转载糖蛋白——CD4。
      我的实验材料：新鲜组织，液氮速冻（既有直接扔里面的，也有用锡纸做纸盒漂上面的），—80°保存至少72小时，然后切片。所用切片机是浙江益迪产的YD-1900冰冻切片机。一抗购自美国SBA鼠抗鸡CD4单抗，二抗是购自中山金桥的SP9002二抗试剂盒。
      我的试验方法：切片5微米，然后室温放置30min以上，—20°丙酮固定20min，然后再室温放置30min以上，—20°保存。然后常规免疫组化：pbs 3×5min，3%双氧水20min，pbs 3×5min，二抗的A液（也就是山羊血清封闭）37°×30min，甩去，加一抗（pbs，1：100稀释）4°过夜，pbs 3×5min，j加B液（羊抗鼠的二抗），pbs 3×5min，加C液（也就是辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素），pbs 3×5min，DAB显色
作者: daniel    时间: 2009-7-6 16:26     标题: 再附一张图

这是40倍镜下的图片

[ 本帖最后由 daniel 于 2009-7-6 16:43 编辑 ]
作者: daniel    时间: 2009-7-6 16:39

在线等高手……

[ 本帖最后由 daniel 于 2009-7-6 16:42 编辑 ]
作者: shanghainese    时间: 2009-7-7 12:50

为何不用苏木素做细胞核复染？
要用苏木素做细胞核复染，才能看清楚组织细胞的结构。
作者: fangdang    时间: 2009-7-9 11:23

为何不用苏木素做细胞核复染？
要用苏木素做细胞核复染，才能看清楚组织细胞的结构。
作者: daniel    时间: 2009-7-9 14:08     标题: 谢谢老师的建议

原来我们实验室做的小鼠CD4，CD8不复染也出结果了，但我这个怎么就不出呢！
这是我师姐做的小鼠胸腺CD4的照片

[ 本帖最后由 daniel 于 2009-7-9 14:17 编辑 ]
作者: daniel    时间: 2009-7-9 14:20

我正在做复染的切片，昨天做了一张，苏木素染得不成功，今天再试一张，预计明天贴出来

谢谢老师们提的宝贵意见
作者: shanghainese    时间: 2009-7-10 13:07

另外，还要有ISOTYPE CONTROL。
否则没法看。
作者: daniel    时间: 2009-7-21 10:29     标题: 复染照片，各位老师帮忙鉴定

这是100倍镜检CD8,组织为胸腺组织
作者: daniel    时间: 2009-7-21 10:30

400倍镜检CD8，胸腺组织

[ 本帖最后由 daniel 于 2009-7-21 10:32 编辑 ]
作者: shanghainese    时间: 2009-7-21 11:53

作者: daniel    时间: 2009-7-22 17:11

en ,那老师您看这些黄褐色的颗粒是结果吗？
作者: shanghainese    时间: 2009-7-23 11:33


从左面张图来看象是CD8染色。但是右面张图里有许多非特异性染色。
作者: daniel    时间: 2009-7-23 18:31

我们老板也对我的结果报怀疑态度，很郁闷，老师您说我现在有必要换个方法吗？我现在用的是SP法，但我参考的SCI文献都是用的SABC法，您看呢？
作者: shanghainese    时间: 2009-7-24 12:03

引用:
原帖由 daniel 于 2009-7-23 18:31 发表
我们老板也对我的结果报怀疑态度，很郁闷，老师您说我现在有必要换个方法吗？我现在用的是SP法，但我参考的SCI文献都是用的SABC法，您看呢？
我要是你的话，我考虑换抗体或降低一抗浓度。
作者: daniel    时间: 2009-7-24 18:25

恩，谢谢老师的指导！
我会继续摸索浓度！
再有好像全球把这种一抗做成商品的就这一家!
我用的是southenbiotech的CD4、CD8，的IgG型单抗，种属是鸡！
如果哪位老师知道有第二家做这个，希望您大方点，吱声一下
作者: shanghainese    时间: 2009-7-25 12:38

你问一问southen biotech 有什么具体的注意事项。



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