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标题: 求助，免疫组化不成功啊 [打印本页]

作者: daniel 时间: 2009-7-7 11:13 标题: 求助，免疫组化不成功啊

各位老师：
   小学生科研有一块是做冰冻免疫组化的，做的不成功！最最重要的是，我不知道自己做的有没有阳性结果！如果有老师懂这一块的话，希望能得到您的指点！
   实验动物是鸡，目的蛋白是T淋巴细胞细胞膜上的一类跨膜转载糖蛋白——CD4。
   我的实验材料：新鲜组织，液氮速冻（既有直接扔里面的，也有用锡纸做纸盒漂上面的），—80°保存至少72小时，然后切片。所用切片机是浙江益迪产的YD-1900冰冻切片机。一抗购自美国SBA鼠抗鸡CD4单抗，二抗是购自中山金桥的SP9002二抗试剂盒。
   我的试验方法：切片5微米，然后室温放置30min以上，—20°丙酮固定20min，然后再室温放置30min以上，—20°保存。然后常规免疫组化：pbs 3×5min，3%双氧水20min，pbs 3×5min，二抗的A液（也就是山羊血清封闭）37°×30min，甩去，加一抗（pbs，1：100稀释）4°过夜，pbs 3×5min，j加B液（羊抗鼠的二抗），pbs 3×5min，加C液（也就是辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素），pbs 3×5min，DAB显色

作者: daniel 时间: 2009-7-7 11:19

Dear master,thanks for your attention.Wish your reply!

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