标题: 求助：甲基萘醌四唑氮蓝染色法，谢谢。 [打印本页]
作者: ssyjjby 时间: 2009-8-16 01:54 标题: 求助：甲基萘醌四唑氮蓝染色法，谢谢。
请简介甲基萘醌四唑氮蓝（M-NBT）染色法，强染阳性说明什么？适用于什么情况？它和底物， a-磷酸甘酶是什么回事。非常谢谢了。
作者: ylzhao 时间: 2009-8-30 22:09
你是不是染肌肉组织? 我知道有这种四唑蓝法染色,别的方法就不清楚了.
NADH-TR（NADH-tetrazolium reductase）染色
1．
下列液体内，37℃孵育30min
0.05mol/L Tris盐酸缓冲液（pH7.4）30ml
NBT（nitro blue tetrazolium）30mg
β-NADH（β-nicotinamide-adenine dinucleotide）24mg
pH值调到7.4
2．
依次30%-60%-90%-60%-30%丙酮分化
3．
水洗
4．
甘油明胶封片。
这种液体每次都需要从新配制
0.05mol/L Tris-HCl缓冲液：
Tris(hydroxymethyl) aminomethane 6.06g，浓盐酸3.43ml，蒸馏水1000ml配制。pH7.4。
甘油明胶：明胶7g，加蒸馏水40ml，室温放置2小时。加甘油50ml，苯酚0.5g在70-80℃缓慢搅拌15min。纱布过滤保存。使用时60℃加热直到呈液状，然后封片。
改良还原型辅酶Ⅰ[wma]四唑蓝[/wma]还原酶染色法
材料与方法
取二头肌，四头肌样品经异戊烷予冷器冷冻在-160℃液氮后恒温冷冻切片机切片10微米。
染色液配制
还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)- Sigma N8129
8mg
硝基四唑氮蓝Nitro blue tetrazolium - Sigma N6876),
10mg
0.2 mol TRIS HCl缓冲液pH7.4 10ml
二甲亚砜DMSO 0.5-1.0ml
以上染液临用前新鲜配制，配制方法将NADH，NBT，TRIS HCI混合后加入DMSO然后用玻璃棒搅拌2-3分钟，过滤后使用。
染色步骤
1 将冰冻切片放入染液中盖好染色缸的盖子置37℃-55℃水浴12-25分钟。
2 流水冲洗1分钟。
3 蒸馏水洗3次。
4 甘油-明胶封片。
结果 基质网和线立体呈蓝紫色，肌纤维Ⅰ型比Ⅱ型稍微黑一些，血管壁同时也被染色。
[ 本帖最后由 ylzhao 于 2009-8-30 22:47 编辑 ]
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