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2008-6-9 13:16
Timm’s 铜染色法
固定：福尔马林固定或新鲜组织
技术方法：石蜡切片或冰冻切片
试剂：
液体A ：5%硝酸银水溶液
液体B：对苯二酚2.0g， 柠檬酸5.0g， 蒸馏水100ml ，液体可以贮存在4℃暗处一个月。
步骤：
1．石蜡切片脱蜡至水
2．0.5%硫化铵5min
3．充分水洗
4．用0.1N盐酸2-3min祛除铁和硫化锌液（15%三氯醋酸也可以使用）
5．水洗
6．切片置新鲜1份A液和5份B液过滤后使用，将硫化铜转化为硫化银3min就可以完成。
7．水洗
8．脱水，透明，封固
结果：铜沉积物被染成黑色
Comments:
The following control procedures should be employed with contguous sections. (1)Omit step 6.
(3)Treat With 0.5% potassium cyanium cyanide before developing to remove copper sulfide.(4)Stain with Perl’s method for iron.
铜染色（Copper stain）
原理：铜若丹明法比红氨酸法更敏感，然而，若丹明法被证实是蛋白与铜相结合而不是与铜本身结合。因此，尽管我们认为此法具有更高的敏感性，但是有可能因其特异性低于若丹明法从而得到假阳性结果。
注意：在以下步骤中这些化学品对健康有害：若丹明害处更多的信息可以参考安全数据表。
1．若丹明饱和储存液
若丹明（D# 90）*0.2g
纯酒精100ml
注释：确保容器底部出现结晶直到液体饱和到血红色。
*目录中列出的若丹明“（P-Dimethylaminobenzalrhodanine）”或“5[p(Dimethylamino)benzylidene]rhodanine”可以互相代替。
2．若丹明工作液
饱和若丹明储存液1.5ml
蒸馏水50ml
注释：测量并混合前应摇荡储存液。加到载玻片上之前也要摇荡工作液。使用后丢弃。
3．Gill’s 苏木精（见H&E染色步骤）
对照：知道肝和脾有大量的铜
步骤：
1．切片脱蜡至水
2．切片在若丹明工作液立式染色缸内37℃过夜或56℃2小时
3．蒸馏水充分水洗
4．Gill’s苏木精染核1min
5．自来水返蓝，不能用氨水返蓝（NH40H）
6．充分蒸馏水洗
7．脱水，透明，永久封固剂封固
结果： 铜颗粒亮红或红-**，细胞核淡蓝色。组织中铜浓度低，染色后盖上盖玻片颜色会稍微褪色。
若丹明铜微波步骤
若丹明工作液
若丹明贮存液 5ml, 蒸馏水45ml
1．切片脱蜡至水
2．将切片放入50ml若丹明工作液，把探针放入液中，调TEMP/KOOK/HOLD微波炉功率到4水平的135 然后按开始
3．当温度达到了搅拌液体调10min
4．充分蒸馏水洗
5．切片用Harris’s苏木精染1min
6．充分水洗
7．自来水冲洗返蓝
8．蒸馏水洗
9．脱水，透明，封固
结果：铜颗粒亮红或红-**，细胞核淡蓝色。
仅供参考
[ 本帖最后由 ylzhao 于 2008-6-9 13:23 编辑 ] |
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