全国冰冻切片比赛获奖名单和点评(重编:带问题切片照片)

一等奖: 广西医科大学一附院  王华
二等奖: 上海复旦大学附属肿瘤医院  周学科

              浙江大学医学院附属第一医院  杨如菊

              浙江省杭州市第四医院       赵海菲

三等奖: 贵州省肿瘤医院  杨勇

              北京市中日友好医院  杨磊

              四川省雅安市人民医院   祁宏枝

              北京大学医学部病理系    马晓龙

              福建省邵武市市立医院   陈海燕

              福建省肿瘤医院         朱伟峰

       这次比赛我看到了明显的变化,非常高兴:一是广西出了一匹黑马,这相当难能可贵。二是质量明显提高。三是北京、福建进步非常快。这说明我国的技术水平在快速提高。
下面我重点点评一下这次比赛中存在的问题,希望能给以后的工作和比赛提供经验:
一、超时原因:
1、苏木素、依红的染色时间是这次比赛超时的最根本原因。由于大会提供的苏木素需要染2.5-3分钟,依红染1分钟,而一般选手在家时往往苏木素只需要1分钟,依红1秒钟,这就需要选手根据这个变化,加快平时比赛所用各种步骤的速度,因为苏木素依红的时间是不能省的,如果你还是按原来的速度来操作,时间肯定来不及。
2、过于追求完美:很多选手对切片的要求过高,一张一张反复切,希望能切出一张完美的片子,这个观点是错误的。一般来说,前面一二张往往是最好的,因为越切到后面,越感到后面的片子没有前面好,心情会越来越紧张,最后最多也只能切到和前面差不多的片子,大多数是比前面的差。
3、有的选手错误的动作太多:切片干燥了后才固定;用电吹风加热切片,还一张一张吹;用电吹风吹干片子等等。这些动作不仅延长了操作时间,还且对质量有着致命的影响:细胞退变,切片后立即固定,细胞形态好,这是所有步骤的关键,而且可以节省时间。电吹风加热切片,如果是一张切片,可能会快,三张切片一张张吹,就未必会快,而且会造成三张切片染色深浅不均匀,因为你加热的时间、电吹风的热量不会稳定。电吹风吹干片子更不可取,酒精脱水,也就几秒钟就完成了,不会不干净,你用酒精脱了还用电吹风吹,增加啊不少时间,主要是增加了细胞收缩。
二、切片质量
1、冰晶多:这是最普遍的现象,主要原因是冷冻速度慢:(1)有的选手将标本托盘放在外面,这是错误的,热的托盘会延长冷冻的时间,增加冰晶的产生。(2)胶放得太多,同样也会延长冷冻的时间。(3)没有用冷锤压(厂家没有提供)。
2、细胞退变:切片粘在玻片上要立即固定,固定时间越快,细胞退变越少,从固定速度上看,甲醇是最快也是最好的。还有选手用加热方法固定,更错,细胞核结构几乎看不清。
3、细胞收缩:
用电吹风吹或用丙酮固定,都会引起细胞收缩,但如果没有对照,不是很明显。
4、染色较浅:
主要是苏木素的染色时间和在家不一样,这就要求选手的基本功了,很多选手不习惯,由于前面切片花费时间太多,染色来不及或经验不足,对深浅肉眼观察不准确。其实这时应该用显微镜观察一下,这只要花费十几秒钟。
5、切片有很多空洞:
主要是肝脏,由于动物冷冻后发脆,粗切时肝组织呈大块大块的粉状,肝切片上有很多的小白点(即肝组织掉出),这就要求我们多细切几下。
6、皱折:
主要是选择展片的方法不一样造成:有的人用毛笔慢慢拉下在切片台上,然后用玻片粘;有的选手用毛笔在组织块成小卷后拉开,然后用玻片粘;这二种情况在组织好切,心情平各时,也能做出好片子。但在比赛时,肾上腺素较高,手多多少少会颤抖,容易造成拉力不均匀,导致切片出现小皱。还有选手组织边上留胶太少,会造成组织边缘出现皱折。
7、组织发脆:
由于本次比赛选用了三种组织:肝、肾、肠。为了使所有组织都能好切,并且不影响后面选手比赛。所以规定冰冻切片机的室温不能改变,-18度。快速致冷后的肝组织会明显发脆,如何解决?有的选手不懂,就这样切下来了,切片上就会有很多的裂痕。有的选取手用手去摸,较果好一点,但有可能全部去除,会有少数地方出现裂痕。解决的方法:把样本头温度调至-14度即可。现在很多冰冻切片机(双压缩机)都有这功能(切片机里的OT就是样本头的温度)。徕卡的1950更明显,把那头的功能单独做出来,当然买的时候千万注意要配制,因为1950的很多功能都是选购的,如果你买标配,会有一些很实用的功能没有。也可以将冻好的组织放室温略复温一下。
8、包埋面:主要是肠要竖起来包,只有在样本托是冷的情况下,才容易将肠竖起来,而且肠间质水份不多,不需要冷锤压。
三、心态:
   很多选手过于在意比赛的成绩,导致心情太紧张。比赛比的就是心里素质,如果你太在意,就会发挥失常。有的选手手在发抖,还有的紧张得满头大汗,这都不会取得好成绩。只要你和日常工作时一样做,就会有好成绩。我科派的选手才工作二年,做冰冻也就三个多月,一方面是想让她出去学习学习,另一方面她没什么压力,一个新手不抱什么希望,只要完成任务就行,所以她只用了14分钟就全部完全了,而且拿了二等奖。一颗平常心,也是比赛成功的诀窍。
四、过于自信:
   也有少数选手过于相信自己的水平,忘记了强中自有强中手,你的切片质量在你本地可能是最好的,但不等于在全国是最好的,所以应该多向别人学习,多看看别人的片子,找出自己的差距,没有最好,只有更好。学习是无止境的,只有向别人学习,才会进步。过于自信会固步自封,停止前进。
四、冰冻切片的注意事项:
1、细胞核的结构:这是病理诊断的关键,要想有一个正确的诊断,必须要有很好的细胞核结构,要求没有退变,没有收缩,核内没有空泡,染色质清晰可见。这也就包含了颜色要染得好,过深或过浅的染色都会影响诊断的判断。根据这:干燥后固定,加热等方法都会影响细胞核结构,所以都不可取。然后就是要组织不发脆,细胞没裂痕(这就要求使用样本头的功能,把组织加热至-14度,用手摸不可能全部解决)。最后就是片子要厚薄适中,太厚了也会影响效果(比赛一般5-7微米),太薄了会影响染色效果,切的慢的选手可选择5微米,但如果是切得很快的选手可选择7微米,比赛用的是新机器,特别容易切的太薄。如果你做好这一块,应该说百分之六、七十的分数就有了。
2、冰晶:冰晶会使诊断产生误诊,特别是软组织肿瘤和含水量较高的组织。这是我们很多技术员不重视的,也有很多人认为,冰冻切片机室温一样,没办法改变,大家都一样。其实不然,这里也有很多决窍:托盘要冷,不要把托盘拿出来放组织,更不能把托盘放在外面;胶要少,不放最好(但缺点是组织容易粘不牢,切片时边上会有小皱),必须用冷锤压,这样冻的更快,在机器没有冷锤情况下如何解决?可以用托盘的背面压,这个方法我试过几次,存在一定风险,就是怕粘住了下不来,要等冻透了才行,拿下来时有可能是不该下来的那面先下来了。所以我科选手也没敢用。第一名广西的选手有可能用了,我看到过她片子的外观:特别大,呈园形,可能是压过了。这就要求我们技术员要搞清楚冰晶的形成机制和随机应变的能力。
3、注意有没有切全,有没有空洞,有没有污染。
4、小皱、刀痕、气泡等等,这些都是小分,只有在以上相同情况下,才会有差距。
  很多选手认为只要切得平整,没皱,没气泡,没刀痕,染色好,就有高分,其实是错误的,这只是做了表面文章。所以说:一个不懂诊断的技术员成不了好技术员,因为你不知道诊断需要什么,重点是什么,你就不知道如何去提高质量。因此做一个好的技术员必须学会诊断。
5、固定液的选择并不十分重要:95%酒精、甲醇、AAF液、环保固定液都是醇性固定液,性质相差不大,区别并不十分明显。
6、掉片:冰冻片直接固定,一般不会掉片,只有4%甲醛容易掉。也可能是片子切的太厚了,切薄了就不容易掉。在日常工作中,蛋白质成份较少的组织:角质层的或软骨,如指甲、气管容易掉。解决方法:在甲醇内加冰醋酸也不容易掉;有一些没有蛋白质的我试过用液基细胞(TCT)的阳离子玻片(国外免疫组化也用),效果非常好。

7、

染色太浅可以按顺序退回去重染,包括苏木素和伊红。染色后脱水低浓度酒精过得太快导致脱水不彻底,片子上还有水珠;透明度不好;透明液出来后擦片子时间太长,片子干了,出现空气结晶;片子封反了等等这样的低位错误千万不能犯。
    这是我在这次比赛中的个人感觉,希望对大家有帮助,比赛的主要目的不是为了比谁强,而是应该发现问题,找到解决问题的方法,改正以前不正确的方法,共同提高全国的切片水平。如果比完了,奖一发、酒一喝,回家原来怎么做还是怎么做,那这样的比赛就没有任何意义了。



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评论(42)



回复 6# 的帖子
丁老师,你好,我们湖南这边冰冻基本是切5μ 淋巴组织4μ。脂肪较多等乳腺才切7μ。为何这次比赛常规切5-7μ合适呢?



1、因为比赛用的机器是新的,一般切的都比较薄。2、切的不是淋巴组织。




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