wyuer

最近研究TCT的制作
发现很多书上都是写制片后直接将玻片放入95%的酒精中固定 也就是湿固定 染色效果会比较好
也尝试做了几次
同一个标本做了两个片子 一个湿固定，一个晾干后再固定
染色后确实湿固定的片子效果会好一点
可是湿固定的片子很容易出现掉片
基本细胞没剩下多少

请问下，如果要湿固定，是不是要预先处理载玻片？
具体怎么操作呢？

PS：制片过程中有用滤膜，所以片子出来后基本是半干状态，没有太多水分，可是湿固定依然会出现掉片，现在基本都是晾干后再固定的

[ 本帖最后由 wyuer 于 2010-6-24 21:06 编辑 ]

dingwei

湿固定的片子很容易出现掉片，说明你的片子还太湿，水分太多。要把试管口水吸干，再吸出沉淀涂片。
液基制片，如果是胸腹水，没什么意义，细胞质量、数量形态也都没有离心法好，多少有退变。
湿固定不需要预先处理载玻片。
如果是液基细胞，玻片必须处理，否则会掉片。

wyuer

是用细胞涂片离心机做的TCT的片子
也就是通过高速离心将细胞均匀的贴附在玻片上
现在离心速度1000转/分
如果提高离心速度会不会提高细胞的贴附从而改善湿固定掉片情况？

dingwei

提高离心速度会提高细胞的贴附性，一般2000转/分，速度再高玻片容易断。

wyuer

谢谢丁老师~
我下周回去再试试~

siliang420

模式细胞制片，载玻片一定要特殊处理的，不然湿固定后肯定有很多细胞会脱落。手工涂片的话，当然用处理过的最好，没有的话也没关系，离心好涂片的时候尽量用吸管多吸中间层细胞，这层的细胞量相对比较密集，细胞相对来说还是有一定的粘附作用的。。。。。不知道我说的对不对，个人经验。。

强子

离心平衡是个问题啊，我们的一次最多放6张的，但只放一张时，平衡就有点问题了，放一个空的进去，肯定分量少点，转速我一般1400，太高噪音大，心里没底，老怕轴坏了，求教———！！！

dingwei

轴坏不了，就是片子会破

yzyxb

防脱片和保存液，这两者都非常重要，否则很容易掉片。湿固定不能用普通载玻片，必须要用防脱片，而也要好的防脱片，除此之外，保存液也不能与防脱片冲突。