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常规病理HE制片技术——注意事项

常规病理HE制片技术——注意事项

  1、组织包埋时注意“二次加蜡”
  包埋操作时具体的注意事项:先取大小合适的不锈钢模型,注入蜡液置于热台上,液面刚好与模型的上缘平齐,不得低于或高于此限。取出包埋盒内的组织,校对正确后用干净的热镊子将所有组织悉数放入模型的底部,待组织与模型内的蜡液充分融合后,按要求排列后迅速移动模型至冷台,至底部石蜡刚开始凝固,用镊子轻压组织数秒,待组织埋平后,迅速盖上包埋盒注上蜡液,约过10 s~15 s,包埋盒与模型周边的蜡液凝固后,再次补充注入少许蜡液,即进行“二次加蜡”,以增加包埋盒的稳固性,防止切片时因包埋盒松动引起切片震颤。注意液面高度不得高于包埋盒上缘,加盖包埋盒时一定要保持其与模型底部平面平行,无前后左右倾斜的现象。用塑料包埋盒包埋组织时,应注意待包埋模型底部石蜡开始凝固后,盖上包埋盒,待其四周凝固后,进行“二次加蜡”。这样做的目的是使得包埋盒与组织蜡块接触更加稳固,减少和防止切片时产生振颤或包埋盒与组织蜡块脱落。另外,还需注意的是二次加蜡不能过满,否则蜡块不能与切片机夹具完全吻合,造成切片时松动震颤,影响切片质量。

  2、组织切片时注意“粗修”
  首先,把切片工作程序分为两步:预备切片和正式切片,即粗修和细切。其次,每天切片之前应先检查切片机的角度并将其调整固定,即刀座的角度约在10°,夹具的上下二边与刀刃平行,左右二边与刀刃垂直。预备切片和正式切片过程中所有角度均保持一致不得随意变动。
  预备切片:应用轮转式切片机(附二档进样装置)装上旧的一次性刀片操作,将蜡块表面多余的石蜡及不平整的组织修去,至组织尽量暴露最大面,用毛刷刷净,重新冷冻以备正式切片。遇有钙化或硬化组织可用5N盐酸对蜡块表面进行软化处理。
  正式切片:用毛刷将切片机打扫干净,换上新的一次性刀片准备切片。切片厚度通常规定为4μm,切片的完整性平整性要求组织完整,厚薄均匀,平整无皱,无刀痕。选取平整光滑无污染的切片置入水面,用纱布将载玻片擦拭干净,捞取切片时使切片与载玻片沿长轴方向平行。漂片仪的温水须每日更换,保持清洁,温度范围在45℃~49℃之间。在载玻片上写上正确的号码后迅速放入烘片箱内,烘片箱温度设置为80℃~90℃左右。通常烘烤15min~30min即可染色。

  3、切片工具的选择,镊子和毛刷
  镊子建议推荐使用口腔科使用的牙科20CM长弯镊,利于切片展片的操作,眼科弯镊太小,操作灵活性低于前者。毛刷建议推荐使用油画笔、水粉笔,普通毛笔松散,容易刺破组织切片,不利于操作。

  4、切片粗修时手轮的操作
  建议推荐手轮全转,而不是手轮上下半转。手轮上下半转时蜡块不小心容易“啃刀”

  5、切片时安全性的操作
  切片机一般都配备手轮锁,可以将手轮锁定于任何位置,防止机器闲置期间意外触及手轮,导致人员意外伤害或夹头撞击刀具。更人性化的切片机往往还配备第二手轮锁,手轮把手只能被锁定于最高点,便于在切片过程中随时更换样品或刀具。
  无论钢刀架还是一次性刀片架,都应该配有牢固的护刀器,在更换样品或机器闲置的时候技术操作人员一定要养成良好习惯,将护刀器覆盖在刀刃上方,对人员和刀具都是一种保护。好的护刀器必须能安全地覆盖刀刃的全长。

  6、切片现场一次性刀片等锐器的存放
  安全是基于良好的组织,在一个干净整洁的实验室,是很少有机会发生事故的。标本处理完毕后,应及时消毒工作台面和取材器械。一次性刀片用完后,玻璃制品一旦破损等等,应废弃在标有“锐器”字样的容器内。

  7、捞片和提片
  捞片的动作是用载玻片将组织切片托起的感觉,容易在玻片上残留多量水份。提片的动作是将载玻片向前上方提拉,将组织切片裱起,这个方法玻片上水份残留很少。

  8、烤片和烘片
  组织切片放在热台受热上,谓之烤片;带有热源的空间受热,谓之烘片。烤片要求组织切片裱起后先倒置将水份沥干,等组织微微发白后,再放置热台烤片,5-10 min。此法要求组织切片不能带有水份,防治组织切片因带有的水份受热后扩散导致组织散片。烘片时只要将组织切片裱起后,即可竖立插入染色架后置入箱内受热。水份的影响不是太大。

来源于微信号:病理之家(binglizhijia)

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成功的经验是逐步积累的,认真学习,

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很好的经验

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