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大鼠实验取材问题

大鼠实验取材问题

我的实验需要同时完成好几个部分,包括取系膜淋巴结,PP结,做流式及细胞培养,还有取肠道组织做病理,以及电镜,结肠内容物做粪便细菌培养,还有肠粘膜IgA测定,同时取材,我现在觉得不知道如何安排顺序比较合理,在这样的情况下如何保证病理切片取材不被破坏呢

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有无菌要求的第一,便便最后,其他就一起来吧,哈哈,其实如果3,5分钟一只,也无所谓先后了。

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谢谢folksmile鼎力相助
肠道组织做病理与肠粘膜IgA测定会不会冲突啊,听说肠粘膜IgA是要刮取肠道粘膜表面粘液来做的,那会破坏肠道粘膜结构吧,还有关于肠道病理取材的问题,我师兄跟我说剪下一段肠子来丢在福尔马林里就可以了,我做过一次,肠粘膜结构有破坏,后来据说是要先剖开肠道,背面贴上滤纸,冲洗干净然后再丢进福尔马林里,可是如果要贴上滤纸,我还怎么取PP结呢,可不可以先取完PP结,但是肠道要泡在PBS里面的,这样会破坏肠粘膜结构吗,而且这样就没有办法刮取肠道粘膜表面粘液了,那该怎么办呀
不知道上面的朋友可否留下联系方式,我可以电话或别的方式请教啊,实在是很心急啊

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别急,搞清几个问题先:1. 大鼠肠子长度是多少?2. 病理取材组织多大?没有道理整个肠子都要切吧?3. 集合淋巴结解剖位置?

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大鼠肠道我没量过,据估计有20-30cm左右,我取病理只需要两段(空肠回肠各一段),约1cm左右,PP结分散在整个小肠,大约2-5cm不等左右距离一个。所以关键是我不知道肠道泡在PBS中会否对肠道粘膜形态有损害,因为为了保持PP结中细胞的活性我可能需要肠道取下后马上泡在PBS中,还是我可以先将肠道铺在滤纸上取完病理后再将肠道放回PBS中,再取PP结,因为PP结一个个取很慢的,就算熟练也要大概15分钟取完。然后头疼的是取粘液,我看文献上说要取15cm左右的肠道,取粘膜表面刮取物,这样子如果破坏了肠道粘膜,就没多少可以取病理的了,而且取粘液也是说要铺在滤纸上用玻片刮,这样会损坏PP结内淋巴细胞的活性吗
真的很感激folksmile的耐心

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淋巴组织没培养过,你分离淋巴细胞培养吗?一般把PBS冻4度,取材后再放冰箱,隔一夜再培养都没事的;取粘液一定要用刮吗?刮完了小肠绒毛都刮平了,还做什么光镜电镜呀。看看粘液是用来干嘛的,如果稀释无所谓,就用洗脱的吧,感觉更合理一些,不然什么细胞碎片,血细胞,淋巴什么都有,只能做离心做酶学了。不知道说得对不对,你再查查文献吧。哈哈,又是周末!

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恩是啊可能粘液只能冲洗来做了,确实文献上也有冲洗来做的,是做ELISA,测IgA.那PP结应该可以先4度保存起来等取好材再磨吧,是吗,是用来做培养的,取上清
哎呀做点试验还真是不容易啊。太多细节不清楚了。
对了,关于肠道取材做病理切片的方法我说的对吗,是要用滤纸吗,可不可以给我个具体的protocol呀,就是取材的那个部分。
周末还要做试验!

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你说:福尔马林,肠粘膜结构有破坏,不知道有没分析是为什么破坏的呀?滤纸拿来干嘛?protocol可不知道了,你们师兄论文里没有嘛?

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folksmile 是个好老师.
我要向 folksmile 学习,因为我太没有耐心了.

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谢谢!不过不敢当,我还要向您多多学习!

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