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包埋后切片,组织的位置是空洞或一条条小碎片,是怎么原因呀?

包埋后切片,组织的位置是空洞或一条条小碎片,是怎么原因呀?

国产脱水机,两个程序同一固定的组织块肝和一个动物组织鸡的肾,包埋后切片肝组织的位置两个程序都是空洞或一条条小碎片,而滤泡样组织在程序1就能切到完整的组织但很皱,而程序2就也是空洞和碎条是怎么原因呀?

脱水程序1:50%乙醇 5h --> 60% 4h --> 70%乙醇10h --> 85% 1.5h -->95%I 1h -->95%II 30min -->100%I 30min -->100%II 30min -->乙醇:二甲苯=1:1 30min -->二甲苯I 15min -->二甲苯II 肉眼观察完全透明后转入下一步 -->二甲苯:石蜡=1:1  61度 1h --> 石蜡I 61度 1.5h -->石蜡II  61度 1.5h -->包埋

脱水程序2:70%乙醇12h --> 85% 30min -->95%I 30min -->95%II 30min -->100%I 40min -->100%II 20min -->乙醇:二甲苯=1:1 30min -->二甲苯I 30min -->二甲苯II 在肉眼观察完全透明后转入下一步 -->石蜡I 61度 1h -->石蜡II 61度 1h -->石蜡III 61度 2.5h --> 包埋

所有用到的石蜡溶点都是55-59度的,经过反复烧溶5次以上投入使用。

请各位老师指点!!

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85%乙醇到100%乙醇时间短了,脱水的关键就在这一步。组织脱水不彻底,以后就不顺利。

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脱水时间太长了,动物组织本身就小,至少要把你现在程序前面几步脱水的时间减半,我原来给研究生课题做大鼠时70%乙醇1h --> 85% 1h -->95%I 30mim -->95%II 30min -->100%I 30min -->100%II 30min -->二甲苯20min -->二甲苯I 20min -->二甲苯20min --> 石蜡I 56度 1h -->石蜡II  56度 1h -->石蜡IIi 56度 1h 包埋

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我去试了,不出现空洞了,但还是会碎

其实我用那么高熔点的石蜡会不会也有点影响?要不要改用54——56度。

[ 本帖最后由 star8823823 于 2011-11-13 09:01 编辑 ]

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your paraffin temperature are not high at all,infiltration temperature should be above the melting temperature 2'C-4'C,from low to high,especially lung,liver ,which is too soft ,too much air in it,the infiltration time shoud be increased to get it hard,so cutting sections will be easy.

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1、组织发脆的原因不是脱水时间长了,而是二甲苯:石蜡=1:1  ,石蜡里是不能加二甲苯的。而且脱水液也没必要用酒精和二甲苯1:1。
2、很多人认为小标本、特别是小动物肝,组织脱水时间长会发脆,真是这样吗?还是我们一直以来的错觉?脱水每道半小时、或每道1小时、或每道8小时,有区别吗?我的实验结果是一样的。细胞长时间脱水不会使组织发脆,这是我总结了几十年经验后得出的的结论。
本人观点纯属个人偏见,希望大家独立判断,正确引用!

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xylene is a universal solvent,it can mix with alcohol and paraffin,this is the keypoint of being a clearing agent,many people prefer mix xylene and alcohol together,both dehydration and clearing.

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回复 7# 的帖子

thanks,you opinion let me know the most important thing about my study.

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谢谢丁老师指点

就丁老师所言,这些天也做了一些比对,按照我的脱水程序2步骤,入二甲苯前的每道试着用不同的时间,最短的20分钟,1小时,2小时,。。。最长的5个小时,出来的结果还是都碎了,比较纳闷,现在正在试后面的从二甲苯往后的步骤时间。
小动物的真不太好弄。。。
国产的机子应该不会有这么大的差距吧

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1、和国产的机子没有关系。
2、只要脱水充分,和长时间脱水没有关系。
3、和梯度酒精浓度有关系,但你的梯度很好,所以也没有关系。
4、和二甲苯有关系,二甲苯时间长了,容易脆。所以,脱水液中不要加,浸蜡石蜡中更不能加。
5、小动物切片时蜡块不能冰,有时在冰上放几秒就可以了,主要和动物本身的质地相关。
本人观点纯属个人偏见,希望大家独立判断,正确引用!

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