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这是什么原因造成的?

这是什么原因造成的?

排除没有加到一抗、检测系统和DAB。
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请说明一下详细情况。

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1、0。3%甲醇双氧水阻断20分钟。蒸馏水洗
2、EGTA水煮抗原修复25分钟后,快速拿出放入冷水冷却。
2、一抗、二抗、DAB加的量都很多,肯定覆盖住,没有干燥。
3、结果出来,7块组织边缘有几块都有不着色现象。几张片子都一样。
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丁老师:我前段时间也遇到了这个问题,不过我是集中在一侧。会不会是在二抗滴加的时候,组织上还有少量水珠,正好湿盒略微倾斜,水珠流于一侧较多,导致抗体稀释,表达不佳引起

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引用:
原帖由 dingwei 于 2012-6-14 22:29 发表
1、0。3%甲醇双氧水阻断20分钟。蒸馏水洗
2、EGTA水煮抗原修复25分钟后,快速拿出放入冷水冷却。
2、一抗、二抗、DAB加的量都很多,肯定覆盖住,没有干燥。
3、结果出来,7块组织边缘有几块都有不着色现象。几张 ...
照片里这几个组织怎么这样圆? 是不是做tissue array?

[ 本帖最后由 shanghainese 于 2012-6-15 22:26 编辑 ]

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是的
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引用:
原帖由 dingwei 于 2012-6-15 22:43 发表
是的
估计是第二次包埋时,外围的组织细胞受到影响,抗原发生了不可逆反应。

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排除此原因,其中有一张做同样的抗体,全部表达都是好的。
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脱蜡剂、酒精是新换的吗?

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引用:
原帖由 dingwei 于 2012-6-16 13:15 发表
排除此原因,其中有一张做同样的抗体,全部表达都是好的。
是同一个蜡块吗?
如果是同一个蜡块, 有问题的切片在先,还是在后?

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