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请教老师们 有做过 mallory三色染色的么?有几个小问题

请教老师们 有做过 mallory三色染色的么?有几个小问题

我们科遇到一个 卵巢 门细胞肿瘤(Leydig细胞瘤)的 ,冰冻切片里面见到很多微小的红色棒状物,怀疑是Reinke结晶。 于是就开了 mallory三色染色(石蜡切片), 我手头的参考书 都没有介绍这个染色的,于是上网查,以下是我采用的方法:
【1.1.3.Mallory氏三色染色法
[固   定] Zenker氏液及Bouin氏液固定最好。甲醛固定的组织必须经过二次固定,以重铬酸钾—醋酸液处理15—60分钟。
[试   剂]
Lugol氏碘液
Mallory氏苯胺蓝液:
苯胺蓝               0.5g
橘黄G                2.0g
1%磷钨酸水溶液      100ml
配制:苯胺蓝以1%磷钨酸液50ml水浴加热溶解;橘黄G以1%磷钨酸液50ml加热溶解, 冷却后分别过滤后混合.
0.5%酸性复红水溶液
[操作步骤]
1.石蜡切片脱蜡至水。
2.Lugol氏碘液脱汞盐结晶,充分水洗。
3.明矾苏木精常规染色,分化,水洗。
4.0.5%酸性复红水溶液染1—5分钟。
5.自来水洗30秒钟或较长,直至纤维将近无色为止,蒸馏水洗。
6.Mallory氏苯胺蓝液染约20分钟(勿水洗)。
7.直接以95%酒精分化(镜下控制)。
8.无水酒精脱水,二甲苯透明,封固。
[结   果]   胶原纤维,网状纤维,盐基性颗粒呈深蓝色;软骨,粘液,淀粉样物质呈淡蓝色;纤维素,神经胶质原纤维酸性颗粒呈红色;红细胞,髓鞘呈橘黄至橙红色;细胞核呈紫蓝色。

但是还是很多疑问。
1、第一步到底需不需要染 苏木素?
2、这个结晶到底有多大(以门细胞肿瘤的胞核为参照)?最好有彩图(废了九牛二虎之力也没找到)
3、染完酸性品红,水洗到纤维无色(镜下观察),红细胞依然是异常鲜红,对判读造成很大干扰,怎么解决?
4、还有些网上的资料说PATH染色也有帮助,是跟染纤维那个方法一样染么?如果不一样,有老师知道到具体操作步骤么?结果如何判读?Reike结晶在PATH染色后是什么颜色?
很少发帖,不懂规矩之处请各位老师多多包涵和指教!


[ 本帖最后由 santanuqiya 于 2013-1-31 23:17 编辑 ]

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过碘酸酸化结晶一般5到10分钟就可以。一般我结晶就消化完了

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