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结肠炎大鼠模型

结肠炎大鼠模型

原型物种:人
来源:三硝基苯磺酸钠(TNBS)导致的结肠炎
模式动物品系
SPF级SD大鼠,健康,6~8W,雄性,体重为180g-200g。
实验分组
实验分六组:正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组。
实验周期4-6 weeks
建模方法:
模型制作方法:动物造模当日计为实验第1天,各组动物造模前禁食不禁水24 h,乙醚吸入麻醉,将一直径2.0 mm、长约12 cm的塑胶管由肛门轻缓插入大鼠体内深约8 cm,缓慢注入一定浓度的TNBS的乙醇溶液,1 min之内完成。灌药完毕后,缓慢拔出塑胶管,用手捏住肛门,提起大鼠尾部,持续倒置3min,避免造模试剂流出,使造模剂充分渗入大鼠肠腔内。对照组动物使用等体积的生理盐水,按上述同样操作进行灌肠。各组动物均正常饲养。
TNBS的乙醇溶液(将体积分数为5%的TNBS水溶液与无水乙醇以体积2:1混合)现配现用。
应用:用于结肠炎药物的研发和机理的研究
模型评价:1. 一般情况观察及体重记录
一般观察:观察各组动物的情况,若出现意外症状,记录情况并及时反馈;记录可能出现的死亡率。体重:从给药前一天开始,每三天称量并记录各组动物体重,直至给药结束,绘制体重变化曲线。实验过程中体重共记录10次体重统计、变化曲线作图。
2. 肠组织取材及大体评分:
各组动物安乐死后,解剖时截取自肛门向上的整段结肠组织
测量结肠长度
进行宏观评价:
各个结肠组织带标尺拍照,记录原始的大体形态,依照评分标准进行评分。
结肠组织大体评分标准如下:
0分  无损伤
1分  充血但没有溃疡
2分  充血而且肠壁变厚但没有溃疡
3分  有一处小溃疡,最长径约0-1cm
4分  溃疡较大,最长径约1-2cm
5分  溃疡较大,最长径>2cm
对应以上评分标准,记录每份结肠组织的具体评分。
评分标准参考文献:Wallace JL, Keenan CM. An orally active inhibitro of leukotriene synthesis accelerates healing in a rat model of colitis. Am J Physiol,1990 258:G527-G534
3.3 结肠组织病理染色:
组织做以下处理:
每个结肠均分成3段,每个动物取材的位置要尽量一致(不管剪切位置是否有病理损伤尽量保持一致)。分别取3段组织中的前1厘米组织,放入同1个EP管中,快速冷冻保存,备用(可用于分子检测)。
余下3段组织片段,用10%的中性福尔马林固定48小时,卷成“瑞士卷”, 用石蜡进行包埋,切片,以便可以看到整个结肠周围。后续进行HE染色进行组织病理学观察。对每个样本进行病理学评分,并统计汇总。
标志因子水平:第27天(最后一次给药完成后24h),取各组动物血清,均分为两份,冻存-80℃。
取其中一份血清样本,ELISA检测血清中IL-10、TNF-α含量。
统计学分析:应用SPSS软件进行统计分析,计量资料以均数±标准差(x ±s)表示,采用t检验,组间比较采用单因素方差分析,P<0.05表示有显著差异
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