返回首页 | 病理技术专题 | 病理资讯 | 病理图库 | 病理技术精英 | 同行交流 | 技术会诊 | 点滴经验 | 常规切片 | 特殊染色 | 分子免疫 | 细胞园地 | 电镜技术 | 收藏本站
发新话题
打印

皮肤光老化(SP)小鼠模型

皮肤光老化(SP)小鼠模型

  • 原型物种

                               
  • 来源

    UVA,UVB紫外导致皮肤老化

                               
  • 模式动物品系

    SPF级ICR小鼠,健康,雄性,6~8W。

                               
  • 实验分组

    实验分六组:正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组。

                               
  • 实验周期

    4-6 weeks

                               
  • 建模方法

    雄性ICR小鼠,年龄约6周。小鼠在正常温度下(23±2℃)湿度(55%±10%)和光照(12小时光照/ 12小时黑暗,无紫外线照射)喂养。喂养一周,等小鼠适应了环境,用8%硫化钠在小鼠的背部剃出超过2厘米x3厘米的脱毛区。

       紫外照射方法:2根UVB灯管和4根UVA灯管(40W,北京电光源研究所)并列穿插安放至自制福照箱中作为紫外福照光源。利用紫外照度仪(UV-B紫外辐照计、UV-A紫外辐照计 北京师范大学光电仪器厂 )测定UVA和UVB的辐射强度。造模前,UV灯管预热10 min,待光源稳定后将实验鼠放入自制的鼠笼内(使小鼠间不能相互攀爬、站立),并放入箱照箱内,鼠笼与UV灯管相距30 cm,根据预试所得最小红斑剂量(MED)及光源强度调节福照时间,照射期间用排气扇降低箱体温度。第1周按1个MED的剂量进行照射,每周照射3次,往后每周照射剂量比前周递增1个MED,直至第4周4个MED为止,之后保持4个MED直至第8周实验结束。模型组小鼠背部皮肤出现明显增厚、皱纹粗深、松弛等光老化皮肤表征,说明小鼠皮肤光老化造模成功。
       MED测定方法:对预实验小鼠分别采用30mJ/cm2、60mJ/cm2、90mJ/cm2、120mJ/cm2、150mJ/cm2、180mJ/cm2的紫外福照剂量对其背部皮肤进行辐照,照射后24h观察小鼠背部皮肤出现肉眼可见红斑所需剂量为最小红斑剂量(MED)。

                               
  • 应用

    n/a

模型评价
1.最小红斑剂量(MED)剂量的确定:
选用2根UVB灯管和4根UVA灯管,造模前,UV灯管预热10 min,鼠笼与UV灯管相距30 cm(此时辐照仪测的 UVA 的总辐照量是3.25 uW/cm2 左右;UVB 的总辐照量是0.134 uW/cm2 左右;这个值略有波动)。
选8只ICR小鼠,用剃毛器将小鼠背部的毛剃掉,再使用8%硫化钠将残留的毛发脱干净,然后设置4个不同辐照的时间点:分别照射10分钟、15分钟、20分钟、30分钟,每个时间点2只小鼠,到辐照时间点,取出小鼠,正常饲养,第2日观察小鼠背部的红斑情况。辐照10分钟和15分钟的小鼠,无明显红斑;辐照20分钟的小鼠能看到轻微的红斑,辐照30分钟的小鼠,红斑很明显。此处选用辐照20分钟,作为预试所得最小红斑剂量(MED)
1个MED=(3.25 uW/cm2+0.134 uW/cm2)*20分钟*60=4 mJ/cm2

2.全鼠背部拍照
  于第4周以及第8周取样前,拍摄全鼠背部照片,以确定是否出现光老化特征(皱纹粗深、松弛等)。
3. 免疫指标: 脾脏和胸腺指标的测定
  小鼠称重并执行颈椎脱位,并立即从小鼠中取出脾脏和胸腺,立即称重。胸腺和脾脏指数根据下述方程
  计算:胸腺或脾脏指数(mg/g)=胸腺或脾脏重量/体重。
  指数(TI)和脾指数(SI)可作为免疫指标。
组织病理学
组织学分析
在最终紫外照射后的24h内取皮肤标本进行组织化学研究。小鼠皮肤样品在4%缓冲中性福尔马林溶液中固定24h,并嵌入石蜡中,连续切片。
标志因子水平
抗氧化指标
  1. 皮肤抗氧化指标分析
  取小鼠背部皮肤组织(约2厘米×3厘米,平均分为8块,一块加福尔马林固定,用于病理检测;一块加RNA later保存,-80度保存,用于测序;剩余的6块,每2块放在一个管子里面,-80度保存)。
  2. 血清中抗氧化活性
  实验结束时,小鼠禁食12小时,但允许自由进入水。血液从眼球中收集到离心管中。在离心后(7000 g,4℃,15分钟)从血液样品中获得血清,然后冷冻并储存在20℃直到分析
统计学分析
应用SPSS软件进行统计分析,计量资料以均数±标准差(x ±s)表示,采用t检验,组间比较采用单因素方差分析,P<0.05表示有显著差异
附件: 您所在的用户组无法下载或查看附件

TOP

发新话题