返回首页 | 病理技术专题 | 病理资讯 | 病理图库 | 病理技术精英 | 同行交流 | 技术会诊 | 点滴经验 | 常规切片 | 特殊染色 | 分子免疫 | 细胞园地 | 电镜技术 | 收藏本站
发新话题
打印

请大家发帖

本主题由 dingwei 于 2022-3-29 10:20 设置高亮

请大家发帖

如果各位老师有文章要投稿,可以直接发新帖(新注册用户需要24小时后才能发帖)。大家对帖子的评价,会纳入以后评审的参考因素中。
本人观点纯属个人偏见,希望大家独立判断,正确引用!

TOP

关于恶性黑色素瘤进行脱色素的方法研究

【摘要】目的 观察KI67、SOX10、蛋白在脱色素后鉴别黑色素瘤的表达情况,进行分析和研究。方法 收集2例黑色素标本,采用高锰酸钾-草酸脱黑色素方法、高碘酸脱黑色素法、双氧水脱黑色素法、三氯异氰尿酸脱黑素法进行HE染色和免疫组织化学染色,观察表达情况及染色强度。
   自动化      脱色素        方法  
在日常病理工作中,我们会遇到黑色素在组织和细胞中沉积,造成组织结构和细胞形态不清晰、细胞的异型性很难观察道。
1、        材料与方法
1.1        材料 1%过氧化氢法、高锰酸钾与草酸法、高碘酸溶液法、8%三氯异氰尿酸溶液法
1.2        操作步骤 组织4μm厚切片,捞片在含有带正电荷的阳离子载玻片上,烤片70°C,一小时,进行脱蜡步骤,然后进行水洗,这时进行脱色素处理。
1.3        方法一 配置1%的过氧化氢浸泡4小时,水洗浸泡在碱性9.0的EDTA20分钟,上机染色。
1.4        方案二 8%的三氯异氰尿酸溶液,先染免疫组化,后进行脱色素。
1.5        方案三 高碘酸溶液浸泡4小时,水洗浸泡碱性EDTA溶液1小时,上机染色。
1.6        方案四 高锰酸钾3分钟,草酸2分钟,水洗浸泡EDTA1小时或半小时,上机染色。
1.7        方案五 自动免疫组化机器的红染试剂,不需脱色素。
1.8        关于机器染色推荐使用相关机器的修复液进行浸泡,效果好,溶液PH值较稳定。不同机器的修复液成分不同,但效果基本一样。
1.9        自动免疫组化机器程序进一步改进,不需要脱蜡,修复时间延长到30分钟,DAB显色5分钟,复染时间12分钟。中杉机器程序也许修改,不需脱蜡,修复时间延长到20分钟,DAB显色5分钟,复染时间12分钟。
1.10        各个图片对比图
  





  





1.11        分析 发现细胞质等电点 pH 在 4. 7 ~ 5. 0,日常工作中 HE 染料 pH 3. 3 ~ 4. 7,小于其等电点的 pH,胞质表现为碱式电离,可被 酸性染料染色,细胞核的等电点 pH 在 3. 3 ~ 3. 6,表现酸式 电离,可被碱性染料染色,胞质与胞核的染色被区分开。高 锰酸钾溶液的 pH 在 7 ~ 7. 5,组织经高锰酸钾溶液后使胞质 的 pH 向碱侧移动,所以要维持细胞内的酸碱性很重要,通过实验研究证明脱色素的方法和技术都是成熟有效的,但从这些实验数据中,我们发现脱色素的时间上存在明显差异,发现方案二先染后脱色素会使DAB着色有轻微的掉色,其他方案先脱色素后染目前没有发现,红染有独特的优势,但它的褪色和保存上容易出现问题。通过方案对比推荐用方案四,染色均匀,脱色素干净,速度快能很好的完成科室的工作。
1.12        讨论 由于网织纤维染色会用到高锰酸钾和草酸,成本低、来源方便、脱色快、操作简单,通过修复20分钟和修复30分钟的实验进行对比,发现出现问题背景主要存在于修复时间上,在二抗时间一样的情况下,修复时间越长背景越重,同时会有飞片现象发生,但这张图通过血清封闭进行染色,背景明显少了许多。从这些方案中我发现这个实验的关键在于脱色后的碱性溶液浸泡,这是整个实验的关键,通过我们多方实验,推荐用成品的修复液浸泡,省去了实验人员的配比检测,为科室减少成本提供了有效的帮助,同时修复液中的成分有助于组织细胞减少破坏并进行细胞修复充盈,维持组织细胞形态提供帮助。通过实验发现修复液的成分中含有表面活性剂,能激发细胞在反应时的亲和力。
参考文献
1、             王丛阳、王家俊、王焱,色素痣组织传统脱黑色素及免疫组化处理方法的条件优化.临床与实验病理学杂志,2018 Feb;34(2)
2、        范慧、李百彦、邹烨、张紧,两种快速脱黑素素的方法.临床与实验病理学杂志,2007 Dec;23(6)
附件: 您所在的用户组无法下载或查看附件

TOP

发新话题