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梯度酒精理论是不是一定准确

本主题由 dingwei 于 2022-6-13 09:26 设置高亮

梯度酒精理论是不是一定准确

一直以来,无论是组织脱水还是染色脱蜡,我们一直有这样的观点,必须用梯度酒精,这个观点根深蒂固,不敢越雷池一步。当有人说没有按照梯度酒精操作,肯定会被人说成是不规范。那梯度酒精这个概念是不是正确,是不是一定要遵行?为此,我们做了一些探究。
  以前,我们一直使用梯度酒精脱蜡,二甲苯三道、然后是无水酒精、95%酒精、75%酒精,在染色过程中偶尔会发现有的片子出现圆形的核不着色区域。




追究原因,我们发现是当天染色的切片数有所增加,有时会多一百多张切片,原来以为是二甲苯脱蜡不干净,但更换了新的二甲苯后,圆点问题依然没有解决,经过多次试验,终于找到原因,是脱蜡的酒精带过去过多的二甲苯,而二甲苯与水不相融,因此有切片上挂着二甲苯颗粒的地方,苏木素就不会着色,这在手工染色时能看的很清楚,切片从酒精出来到水里呈乳白色,油腻腻的,这就是二甲苯没有洗干净,但如果用机器染色,切片在机器里,我们看不到这种情况,自然也不会注意。主要原因是第三道75%酒精含水量太多与二甲苯不相融,无法洗去二甲苯。而我们是根据切片数量来更换试剂的,话是这么说,但如果在染色过程中仅仅多了那么几张切片就停下来更换试剂也不现实。于是我们换了酒精的浓度,用三道95%酒精代替原来的无水酒精、95%酒精、75%酒精,我们发现95%酒精能很好地洗去二甲苯,也能很好地与水相融,由于第三道也是95%酒精,能够很好地洗去二甲苯,再也不用担心切片数量多几张会导致二甲苯清洗不干净。以前我们更换试剂的方式是到了数量后三道酒精全部倒掉(500ml1000张),现在我们是只倒去第一道,后面前移(500ml500张),相同的量比以前多染了500张,更换试剂也更方便,再也不用担心酒精浓度会配错、会倒错、位置会放错。自从用了这个方法后,我们每年染40多万张切片,几年没有出现过圆点问题。因此,我们认为脱蜡用的酒精没有必要使用梯度,全部使用95%酒精效果更好更方便。
  那么组织脱水是不是一定要用梯度酒精?我们都知道,高浓度的酒精会使蛋白质凝固,会使组织发硬而导致酒精无法渗透到组织里去,因此,需要使用梯度酒精。但是,如果是固定充分的组织,酒精仅仅起到脱水作用,并不会使蛋白质凝固,那么,是不是还需要使用梯度酒精?答案是不需要的。但是在日常工作中,我们无法保证所有的组织都固定充分,因此,75%85%酒精等低浓度酒精还是有必要的,那能不能用100%酒精代替95%酒精呢?我们科用无水酒精代替95%酒精(也就是用4道无水酒精)同样取得很好的效果,特别是脂肪多的淋巴结、胃肠道、乳腺等组织。当然这就要根据你们科标本固定的实际情况,不能死板,你可以全部用无水酒精代替95%酒精,也可以用一道95%酒精,用三道无水酒精。值得注意的是,多用了无水酒精,就会多置换出脂肪细胞(不会溶解),会沉淀在酒精桶的底下,过多的脂肪也会影响脱水的效果,那么更换试剂的方式不仅仅要考虑浓度,还要视你们医院组织含脂肪量的多少而定。
  总而言之,梯度酒精有一定的道理,但不是教条,不是规范,不是不可以改变,需要根据实际工作情况进行调整。
  实践是检验真理的唯一标准,我们的原则是:保证质量第、节约成本、操作方便。
本人观点纯属个人偏见,希望大家独立判断,正确引用!

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