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[讨论]半薄切片技术要点

[讨论]半薄切片技术要点

大家好,我们实验室现在做周围神经的半薄切片,但是组织皱缩以及片子褶皱的问题严重,各位有何好的经验,请分享!谢谢!
我们目前采用的是:
2.5%戊二醛固定3-5天,锇酸固定2小时
50%酒精15分钟--70%酒精15分钟--90%酒精15分钟--1:1液(95%酒精:95%丙酮)15分钟--95%丙酮15分钟--100%丙酮1(10分钟)--100%丙酮2(10分钟)--100%丙酮3(10分钟)
丙酮:Epon812树脂 1:1(1小时)--丙酮:Epon812树脂 1:4(1小时)--纯Epon812树脂(2小时)
聚合:35度(16小时)--45度(8小时)--55度(16小时)--60度(48小时)
请各位指点(关于固定的时间,脱水的步骤等) :em02:  

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[讨论]半薄切片技术要点

1、半薄切片的皱缩的解决办法,我们是这样做的:将半薄切片捞起后放在滴有蒸馏水的载玻片上,然后在酒精灯上烘烫,待半薄切片完全展开后,用吸管将水吸走,再将切片烘干即可。最后用1%甲苯胺蓝染色,光镜下观察,定位。
2、脱水我们目前还是用丙酮脱水,浓度为50%、70%、80%、90%、100%(两次,各10分钟),前面步骤各为15分钟。1:1(丙酮:环氧树脂)浸透2小时,1:4过夜(30度温箱)
3、聚合时间安排是:45度3小时,65度48小时
以上仅供参考

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[讨论]半薄切片技术要点

片子皱缩还有可能是包埋剂配方稍软,可以配置硬一点试试看,

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[讨论]半薄切片技术要点

非常感谢888!!
用火焰烘烤有利于片子展平是么?我回去试试看!不过,你说的蒸馏水是一滴很圆很圆的水珠么?我们也是用蒸馏水珠展片子,但是有的时候水珠不够鼓,成一滩,张力不够大,片子就展不平。还有,我们以前也用火焰烤干,片子上的细褶很多,影响观察,不知道是不是因为距离火焰太近温度过高加热不均匀。后来我们用60度烤箱烤干,慢一些,但似乎皱褶稍少一些,强点有限。不知道还有没有更好的办法。

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[讨论]半薄切片技术要点

还想请问一下,有没有经济实惠的粘片剂配置方法,可以让水珠在载玻片更鼓一些?

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[讨论]半薄切片技术要点

fzxd888  说的很对,片子在水滴上可以展开,然后用酒精灯烘,效果很好
水滴散开,那是因为载波片不干净,用纸擦干净,应该就可以了。表面张力的作用下,水滴总是趋于保持最小体积。
酒精灯烘片就可以了,看到水开始蒸发的时候,就可以移开灯了

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[讨论]半薄切片技术要点

请教tequila和各位老师一个问题,要测量周围神经的髓鞘厚度和轴突直径,是用半薄切片在光学显微镜下测量吗?具体怎麽测量?有别的方法吗?谢谢!      

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[讨论]半薄切片技术要点

神经髓鞘厚度和轴索直径的测量可以直接用电镜测量,要取横切面,排除斜切面,而且要测量多个位置,并要采取随机测量法,不过,不同直径的神经纤维,其髓鞘的厚度也会不同。另外,也可以利用图象分析软件进行计算。

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[讨论]半薄切片技术要点

最近我们查阅了一些书,发现组织皱缩(呈茄子型)主要是因为所取神经过粗锇酸固定这一步组织渗透不好造成的,我们将组织去下来之后纵行分成两半,再进行固定,效果就好多了,都是圆的。^_^b

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片子皱褶的问题,我们是用烤片机解决的。虽然花了7000,但是效果真得很不错,很少有摺,现在一个标本只要切几张片子就OK了。

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