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标题: 巴氏染色中饱和碳酸锂返蓝时间如何掌握 [打印本页]

作者: leexiaosun 时间: 2010-4-7 10:14 标题: 巴氏染色中饱和碳酸锂返蓝时间如何掌握

本人有个疑惑，在巴氏染色中为了节省时间，一般都有弱碱促蓝，比如用碳酸锂溶液，促蓝的时间该如何掌握？一般资料上都写到涂片蓝为止。但蓝色的定义各人有各人的观点，有的认为浅蓝就OK，有的则认为深蓝才OK。不知各位有没有一个时间范围供参考一下呢？还有，碳酸锂返蓝后用流水冲洗掉其碱性好还是静水浸泡好呢？时间又是多少？

作者: zl1984 时间: 2010-4-7 23:44

返蓝的时间和分化时间差不多吧，几秒就行了，用流水冲洗

作者: leexiaosun 时间: 2010-4-14 12:44 标题: 回复 2# 的帖子

OK 谢谢

作者: XXCATS 时间: 2010-4-15 00:30

我们是肉眼判断它的颜色和未返蓝之前的区别，不过做久了就大概知道多少时间就足够的~~~
我们也是用流水冲洗~~效果不错~

作者: 白雪 时间: 2010-4-21 23:10

涂片从苏木素染液拿出来后是灰蓝色,分化需2秒左右的时间,然后流水冲洗使涂片呈亮蓝色(这需要自己平时注意观察和把握时间)就行,没有固定的返蓝时间.

作者: leexiaosun 时间: 2010-4-28 08:55 标题: 回复 5# 的帖子

找个时间试一下

作者: siliang420 时间: 2010-7-22 00:03 标题: 回复 5# 的帖子

灰蓝色？我只知道苏木素在酸性条件下是红紫色的，我还没有见过片子刚出来是灰蓝色的。。。。。我们科室用的是进行性苏木素，所以用不着分化，一般都在兰化液里1分钟左右。个人不建议TCT用流水兰化。

作者: Magic 时间: 2010-8-6 10:35

为什么不用流水兰化呢？我觉得还可以啊，效果也不错哟。还想问下进行性苏木效果比一般的好吗？

作者: 铁牛 时间: 2011-3-29 11:37

这要看你的碳酸锂是什么浓度的，个人认为淡蓝色就可以了，深蓝色一般上是胞浆上着的苏木素颜色很重了

作者: siliang420 时间: 2011-5-26 12:55

我不建议流水蓝化是因为需要的时间比较长，至于何时算蓝化好了，仁者见仁智者见智吧。最好在镜下观察下。

作者: baiyanqiong 时间: 2012-9-21 15:23

引用:

原帖由 siliang420 于 2010-7-22 00:03 发表
灰蓝色？我只知道苏木素在酸性条件下是红紫色的，我还没有见过片子刚出来是灰蓝色的。。。。。我们科室用的是进行性苏木素，所以用不着分化，一般都在兰化液里1分钟左右。个人不建议TCT用流水兰化。

请问进行性苏木素是什么东东，恕我孤陋寡闻，我还没有听说过。能解释一下吗？谢谢！

作者: fangqingquan 时间: 2012-12-29 16:33

引一段王华的分析给大家参考：
“染完苏木素分化后进行一步“返兰”，就是用碱性溶液中和掉组织中的酸性，使苏木素呈现蓝色。如果不用氨水、碳酸锂溶液返兰，用温水、流动自来水浸泡时间长一些也能去除组织中的酸性，使苏木素返兰。
返兰之后要充分将组织中多余的碱性溶液充分洗净，因为残留的碱性溶液会影响伊红的着色。
伊红是通过伊红分子中的羧基电离后带负电，与蛋白质中带正电的氨基端或侧链氨基（-NH4 ）结合，使蛋白质染色。
如果碱性溶液在组织中残留，蛋白质是两性化合物，在碱性环境中，蛋白质就出现羧基端电离呈负电，氨基端不带电，整个蛋白质分子呈负电。伊红是负电，蛋白质是负电，负负相斥作用，伊红就染不上了。
在返兰后清洗的实际操作中，容易出现的现象是碱性返兰液清洗不彻底，组织局部碱残留，就呈现出同一片组织内局部红局部不红的现象了。

尽管氨水和饱和碳酸锂都能达到返兰的目的，基于这两种物质不同的化学性质，这两种溶液在使用过程中还是有一些差异的。

氨（NH3）：易溶于水成为氨水（NH3H2O,也称氢氧化铵），氨水具有强碱性。氨的分子结构：NH3，N原子为不等性sp3杂化，4个杂化轨道中的3个分别与H原子形成σ键，整个分子呈三棱锥形结构，N原子的另一个sp3杂化轨道被一对孤对电子占用，位于棱锥形的顶端。

碳酸锂（Li2CO3）：强碱弱酸盐，具有碱性。1g溶于78ml冷水。

碳酸锂在水中的溶解速度比氨水要慢，所以返兰后浸泡清洗的时间要稍长一些。无论哪种返兰液，都要保证清洗干净。个人经验：冷水浸洗3次，每次1分钟。第2第3次可以用40度左右的温水清洗，可以缩短时间，效果不错。
N的电负性是3.05，并且氨基有一对孤对电子，使得氨基中的N极易与蛋白质中的H形成氢键。氨基这个特性引起组织中蛋白质的二级三级构象发生改变，导致蛋白质出现“松解”的现象。组织与载玻片粘连，组织与载玻片形成氢键起到重要作用。氨可以破坏组织与载玻片的氢键，使组织与氨形成氢键。这也就解释了为什么用氨水进行返兰，组织容易掉片的原因。”

作者: fangqingquan 时间: 2012-12-29 16:42

引用:

原帖由 leexiaosun 于 2010-4-7 10:14 发表
本人有个疑惑，在巴氏染色中为了节省时间，一般都有弱碱促蓝，比如用碳酸锂溶液，促蓝的时间该如何掌握？一般资料上都写到涂片蓝为止。但蓝色的定义各人有各人的观点，有的认为浅蓝就OK，有的则认为深蓝才OK。不知各 ...

我个人认为用碳酸锂或氨水促蓝，1~3秒就可以了，返蓝后一定要充分冲洗，冲洗时间应根据自己所在地的条件而定（如：气温、水的酸碱度等），以制片后不会出现同一涂片上部分细胞（细胞质）红部分不红的现象为准。

作者: myzh 时间: 2013-5-21 12:50 标题: 回复 12# 的帖子

王华是牛人呀希望在病理技术界一直干下去，这样可以提高病理技术的地位。

作者: echohe 时间: 2013-6-20 22:10

同意13楼的，一定要冲洗充分

作者: sivawong 时间: 2013-6-24 17:56

学习了~~~~~~~~~~~~

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