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标题: 双重免疫组化的步骤？ [打印本页]

作者: lynn 时间: 2001-12-20 22:49 标题: 双重免疫组化的步骤？

请问各位同仁双重免疫组化的步骤和关键点，以及注意事项有哪些？
多谢！

作者: dingwei 时间: 2001-12-26 16:26 标题: 双重免疫组化的步骤？

1、切片脱蜡至水
2、阻断内源性过氧化物酶(198毫升甲醇或水+2毫升30% H2O2)室
温20分钟。
3、pH7.2缓冲液洗三次。
4、胰蛋白酶消化37 ℃，30分钟。（或按说明书要求：放入抗原修复液内微波修复20分钟、或电炉加热30分钟、或高压锅加帽出气后3分钟，快速冷却；或不处理）
6、滴加正常血清37 ℃，30分钟。（可不用）
7、擦去多余血清，加一抗37 ℃，30分钟。
8、pH7.2缓冲液洗三次。
9、滴加生物素化二抗，37 ℃，30分钟。
10、pH7.2缓冲液洗三次。
11、滴加ABC或S-P复合物，37 ℃，45分钟。
12、pH7.2缓冲液洗三次。
13、DAB或（BCIP/NBT紫蓝色）显色3～10分钟。
14、pH7.2缓冲液洗三次。
15、双标阻断液，10分钟（可不用）
16、滴加正常血清37 ℃，30分钟。（可不用）
17、擦去多余血清，加第二种一抗37 ℃，30分钟。
18、pH7.2缓冲液洗三次。
19、滴加生物素化二抗，37 ℃，30分钟。
20、滴加碱性磷酸酶复合物，37 ℃，30分钟。
21、AEC显色
22、水洗
23、苏木素淡染，蓝化，脱水，透明，封固。

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