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标题: 请教银染相关问题,急! [打印本页]

作者: daniel123    时间: 2010-9-17 15:16     标题: 请教银染相关问题,急!

本人正在采用de olmos改良的铜银染法对神经溃变纤维进行染色,切片厚度为6um,并将切片贴附在载玻片,但是始终然不到溃变神经纤维,倒是出现好多正常的神经细胞,不知道为什么。是不是,切片太薄呢?请教大家能够解答一下,在下不胜感激!谢谢!
还有,我的切片前处理是这样的,多聚甲醛心内灌注,然后25%蔗糖脱水,冰冻切片,然后在-80℃冰柜中保存,然后取出烘干。接下来就是染色。
染色步骤:
1. 蒸馏水洗3分钟,擦干。洗5次。
2. 铜银溶液40℃浸泡1h,然后冷却至室温。过夜。取出,擦干载玻片。
3. 丙酮45秒
4. 氨银溶液浸泡30分钟,并在水平摇床下,轻轻摇动。取出,擦干载玻片。
5. 还原液(柠檬酸,10%甲醛溶液)浸泡1分钟。取出,擦干载玻片。
6. 0.3%铁氰化钾溶液中浸泡,10分钟。取出,擦干载玻片。
7. 蒸馏水洗1分钟。取出,擦干载玻片。连续洗三次。
8. 硫代硫酸钠溶液浸泡1分钟。取出,擦干载玻片。
9. 蒸馏水洗1分钟。取出,擦干载玻片。连续洗三次。
10. 明胶乙醇溶液浸泡5分钟。自然干燥,过夜。
11. 梯度乙醇处理,二甲苯透明,封固。
请问哪些是需要注意的地方?指点一下迷津。

[ 本帖最后由 daniel123 于 2010-9-27 17:30 编辑 ]
作者: daniel123    时间: 2010-9-17 16:29

没有老师解答一下吗?
作者: daniel123    时间: 2010-9-17 22:23

楼上的兄弟,这个回的太牛叉啦!
作者: daniel123    时间: 2010-9-20 20:38

期盼大家给点建议哟!
作者: daniel123    时间: 2010-9-27 17:37     标题: 请前辈指点一下

请前辈指点一下,为什么会出现棕色的神经元?

[ 本帖最后由 daniel123 于 2010-9-28 11:25 编辑 ]




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