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标题: 求助，冰冻切片免疫荧光染色无荧光。 [打印本页]

作者: flowers17 时间: 2010-12-15 14:04 标题: 求助，冰冻切片免疫荧光染色无荧光。

最近在做裸鼠肿瘤组织的免疫荧光染色，检测CD206，冰冻切片来源：新鲜瘤组织经包埋剂固定后，直接切片稍晾干后投入4%多聚甲醛固定1~3min，等多聚甲醛挥干后置于-20°冰箱保存约半个月时间，染色时从冰箱拿出复温后“间接法”进行免疫荧光染色，一抗稀释比例1:100，cy3标记二抗稀释比例为1:50，但是一直没有阳性结果，不知道错在哪一步？求指教，感激不尽！

作者: shanghainese 时间: 2010-12-16 12:41

说明书呢?

作者: flowers17 时间: 2010-12-16 15:41

引用:

原帖由 shanghainese 于 2010-12-16 12:41 发表
说明书呢?

一抗说明书中提到用于免疫荧光比例范围为1:50~1:500，推荐的二抗浓度比例1:100~1:400，恳请斑竹指点！

作者: shanghainese 时间: 2010-12-17 13:00

引用:

原帖由 flowers17 于 2010-12-16 15:41 发表

一抗说明书中提到用于免疫荧光比例范围为1:50~1:500，推荐的二抗浓度比例1:100~1:400，恳请斑竹指点！

我的意思是说你能否将说明书TDS传上来，或说明是哪家公司的产品，catalog number and clone name.

[ 本帖最后由 shanghainese 于 2010-12-17 13:01 编辑 ]

作者: flowers17 时间: 2010-12-21 09:39

引用:

原帖由 shanghainese 于 2010-12-17 13:00 发表

我的意思是说你能否将说明书TDS传上来，或说明是哪家公司的产品，catalog number and clone name.

说明书在附件中，一抗为santa cruze的CD206

作者: shanghainese 时间: 2010-12-21 13:06

immunofluorescence (starting dilution 1:50, dilution range 1:50-1:500).
这里的immunofluorescence不是荧光免疫组化；而是流式细胞仪荧光染色。
如果您不信，可以去问问santa cruze的 Technical Service :
N. China Toll Free: 10.800.711.0752
S. China Toll Free: 10.800.110.0694

作者: flowers17 时间: 2010-12-21 14:30

引用:

原帖由 shanghainese 于 2010-12-21 13:06 发表
immunofluorescence (starting dilution 1:50, dilution range 1:50-1:500).
这里的immunofluorescence不是荧光免疫组化；而是流式细胞仪荧光染色。
如果您不信，可以去问问santa cruze的 Technical Service :
N. ...

哦，呵呵，看说明书不够仔细，检测CD分子，很多确实是用流式细胞仪检测，那这个抗体说明书就没有推荐用于组织免疫荧光染色的稀释比例范围~~~是不是可以参考其他同类分子的说明书推荐呢？

作者: shanghainese 时间: 2010-12-21 16:02

引用:

原帖由 flowers17 于 2010-12-21 14:30 发表
那这个抗体说明书就没有推荐用于组织免疫荧光染色的稀释比例范围~~~是不是可以参考其他同类分子的说明书推荐呢？

不懂您的意思。

作者: flowers17 时间: 2010-12-22 09:49

引用:

原帖由 shanghainese 于 2010-12-21 16:02 发表

不懂您的意思。

昨天又查阅了一些资料，santa cruz介绍的免疫细胞荧光方法中也包括了针对组织切片的荧光染色，而cytometry的方法是会单独另外介绍的，所以我认为说明书中的immunofluorescence是可以用于组织切片免疫荧光染色的。

作者: shanghainese 时间: 2010-12-22 10:27

引用:

原帖由 flowers17 于 2010-12-22 09:49 发表

昨天又查阅了一些资料，santa cruz介绍的免疫细胞荧光方法中也包括了针对组织切片的荧光染色，而cytometry的方法是会单独另外介绍的，所以我认为说明书中的immunofluorescence是可以用于组织切片免疫荧光染色的。

无言。

作者: bud 时间: 2011-1-12 13:39 标题: 二抗是否抗兔

看了你的一抗的说明书，没见二抗的。一抗应该是可做组织切片免疫荧光的，做流式细胞的应是cytometry这个词。你用的二抗是否是抗兔的二抗？二抗的稀释比例不能太高，建议你至少用推荐的最高的稀释浓度。

作者: flowers17 时间: 2011-2-17 13:57

引用:

原帖由 bud 于 2011-1-12 13:39 发表
看了你的一抗的说明书，没见二抗的。一抗应该是可做组织切片免疫荧光的，做流式细胞的应是cytometry这个词。你用的二抗是否是抗兔的二抗？二抗的稀释比例不能太高，建议你至少用推荐的最高的稀释浓度。

二抗是抗兔的，稀释比例1:50应该也是比较高的了，我再调整浓度试试吧，谢谢您的回复！

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