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标题: 求助 [打印本页]

作者: lpfhct    时间: 2010-12-29 12:58     标题: 求助

各位老师:
你们好!我是一名研究生,初学病理技术,现做石蜡切片和特殊染色时遇到以下问题,请各位老师指点指点。
1、小鼠股骨切不出片子之前做过一次骨头的石蜡切片,用的是4%多聚甲醛固定的,后面就是常规冲水、脱钙、脱水、浸蜡、包埋、切片,当时至少能贴出完整石蜡片子(约5-6μm),但是部分组织有点脆。为了增加组织的韧性,我查了查文献,第二次便用苦味酸固定(该固定液之前一直在使用,没有发现问题),然后还是常规冲水、脱钙、脱水、浸蜡、包埋、切片,结果切出来的基本上贴不出好片子;另外,为了增加片子观察面积,包埋时我是将骨头“睡着”包买的,以便于切片时沿股骨长轴切片(之前一直是“立着”包埋的,切片时全是横纵切面)。可能是由于组织本身就很小(直径约2-3mm),结果一修蜡块,组织基本就没有了,于是赶紧切片(5μm),结果倒是能连续切片,但明显可以看到骨髓腔的裂缝,然后一贴片子,立马就裂开了,而且切几刀之后,组织就没了,连翻身的机会都没有了。
问题如下:①第二次实验的失败最可能是哪方面的原因?
②苦味酸固定骨头需要注意些什么?
③为了切出来的组织观察面大一点,将骨头“睡着”包埋是否合理,有没有什么建议?

2、番红精-孔雀绿染不出颜色为了检测关节处的软骨组织,我采用了番红精-快绿(也称孔雀绿、坚牢绿)染色,大致步骤是常规脱蜡至水——韦氏铁苏木精染色液(AB液即用即配)10分钟——水洗10分钟,0.001%快绿(0.01g+1000ml5分钟——1%醋酸冲洗10秒——0.1%番红精(0.1g+100ml5分钟——水洗2分钟——脱水透明封片,结果是镜下一片红(正常应该是软骨及粘蛋白呈橙色-红色,细胞核呈黑色,背景绿色);然后我查了一本病理染色教材,同样的染色名称和染色目的,但染色顺序不一样(先红后绿),中间全部用水洗,结果镜下一片绿;最后,我没有办法了,查了一本《实用组织学技术》(第二版,杜卓**编),里面有一种染色方法叫Harmond坚牢绿法(主要目的是染线粒体),用的染料也是快绿和番红,只是配方不一样,快绿用苯胺油配制,番红用50%酒精配制,先绿后红,中间用苦味酸和磷钼酸洗,最后常规脱水透明封片。
染出的结果见附图,但是也有不同情况的绿色掉色。结果老师一看,还比较满意,说继续做得更好一点,我就不知道为什么了,而且。
问题如下:①前两次的软骨染色最可能的问题出在哪里?②有没有其他推荐的软骨染色方法?
3、甲基绿-派洛宁出不来绿色为了染核酸,我们采用了甲基绿-派洛染色,染色液采用的是碧云天直接配制的染色液(编号C0119),染色步骤也很简单,常规脱蜡至水——甲基绿-派洛宁染色液5/10/90分钟——蒸馏水洗——丙酮脱水、透明封片。
染色结果见图(组织为**组织)。无论是染色时间是5分钟、10分钟,还是90分钟,结果都看不见绿色的核(正常细胞核呈绿色或者蓝绿色,胞浆和核仁呈红色),到时非细胞组织中出现了蓝绿色。尽管标本是经过有害处理的,但按这种结果来看的话,这种有害处理也太高级了吧,损害得这么彻底!?
问题如下:①此次实验结果可信不,如果不可信,最大的问题是什么?如果可信,该怎样进一步证实?②有没有其他推荐的核酸染色方法(试剂我们可以自己配制)。

作者: lpfhct    时间: 2010-12-29 12:59     标题: Harmond快绿染色(20x10倍).

Harmond快绿染色(20x10倍).
作者: lpfhct    时间: 2010-12-29 12:59     标题: Harmond快绿染色(40x10倍)

Harmond快绿染色(40x10倍)
作者: lpfhct    时间: 2010-12-29 13:05     标题: 甲基绿-派洛宁(碧云天公司)染色(5x10倍).

甲基绿-派洛宁(碧云天公司)染色(5x10倍)
作者: lpfhct    时间: 2010-12-29 13:06     标题: 甲基绿-派洛宁(碧云天公司)染色(20x10倍).

甲基绿-派洛宁(碧云天公司)染色(20x10倍).
作者: lpfhct    时间: 2010-12-29 13:06     标题: 甲基绿-派洛宁(碧云天公司)染色(40x10倍).

甲基绿-派洛宁(碧云天公司)染色(40x10倍).




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