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标题: 改良非脱钙骨塑料包埋、切片、染色方法（转载、节选） [打印本页]

作者: 九日 时间: 2011-3-29 15:28 标题: 改良非脱钙骨塑料包埋、切片、染色方法（转载、节选）

此文转载于《诊断病理学杂志》2004 ,Vol . 11 ,No. 4

改良非脱钙骨塑料包埋、切片、染色方法
作者：关　凯 ,张立仁，郑永军，,吴　霞 ,皋岚湘
1 　材料与方法
111 　材料　兔桡骨及兔腰椎横突自体髂骨融合标本各10件,以观察皮质骨、松质骨切片情况。分Ⅰ～ Ⅴ组,每组包括桡骨及腰椎横突自体髂骨融合标本各2 件。桡骨取材长
3 cm、宽015 cm ,横突融合取材长315 cm ,宽2 cm。用环刀(Leitz 1600) 将标本沿长轴切出一平滑面。
112 　方法
1. 2. 1 　固定　10 %中性福尔马林固定24 h ,水洗12 h。
1. 2. 2 　脱水　70 %乙醇24 h ,80 %乙醇24 h ,90 %乙醇24 h ,95 %乙醇24 h ,100 %乙醇48 h。
1. 2. 3 　浸透　Ⅰ～ Ⅴ组分别用A 液浸泡1～5 周,以观察浸透时间对切片结果的影响。
1. 2. 4 　包埋与聚合　Ⅰ组4 件标本分别用A 液(GMA 75 ml+ BMA 25 ml + 过氧化苯甲酰1 g + 聚乙二醇400 10 ml) ∶B 液(N ,N - 二甲基苯胺1 ml + 聚乙二醇400 20 ml) = 40∶1、30∶1、
20∶1、15∶1 ,以观察不同聚合比例对切片结果的影响。摇匀1 min后,放入4 ℃冰箱中聚合24 h。其他各组均以A 液∶B 液= 30∶1 包埋、聚合。
1. 2. 5 　修整聚合块与切片　将聚合块修整为长方形,以组织块在中央,周边有015 cm 聚合体为宜。在Leitz 1512 切片机上,用D 型刀切片。切片厚度为5μm。
1. 2. 6 　染色　直接行改良非脱钙骨Goldner 三色染色[1 ] : ①蒸馏水湿片,甩去多余水分; ②苏木精∶氯化铁= 50∶50 染3 min ; ③用温水漂洗2 次; ④丽春红2酸性品红染液12 min ;⑤015 %醋酸漂洗; ⑥015 %磷钼酸染3 min ; ⑦015 %醋酸漂洗; ⑧亮绿染3～5 min ; ⑨015 %醋酸快速漂洗; ⑩空气中干燥; lv二甲苯透明、封固。另外行苏木精- 伊红染色对照。
2 　结果
2. 1 　浸透时间1～2 周即可,再长时间的浸透对切片结果没有影响。完全浸透标准为组织块呈半透明状。
2. 2 　聚合比例以A 液∶B 液= 30∶1 为最佳。聚合时为防止气泡形成,摇匀A、B 液后立即放入4 ℃冰箱,不必过低温度,聚合后不会产生气泡。
213 　脊柱融合中,皮质骨、松质骨混合生长时切片厚度一致,切片完整,效果满意(图1) ;在桡骨标本中以皮质骨为主,浸透5 周切片时仍有骨皮质碎裂情况,浸透时间延长并不能减少碎裂情况(图2) 。
2. 4 　切片行改良非脱钙骨Goldaer 三色染色效果满意,成熟皮质骨染成绿色,新生骨染成红色,新生软骨染成淡绿色,区分明显,便于分辨。细胞染色满意,可很好地将成骨细胞、破
骨细胞等染色。苏木精- 伊红染色与脱钙骨石蜡包埋切片苏木精- 伊红染色效果相同。

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