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作者: DINGWEI 时间: 2002-1-14 23:24 标题: 固定

[这个贴子最后由dingwei在 2002/10/31 11:09pm 编辑]

固定
固定是技术室工作的第一步，也是在整个制片过程中无法补救的一步。所谓“固定”，就是组织离体后，用各种办法使其细胞内的物质尽量接近其生活状态时的形态结构和位置的过程。固定的目的是为了防止组织细胞自溶与腐败，防止了细胞内的酶对蛋白质的分解作用，使细胞内的各和成分如蛋白质、脂肪、碳水化合物或酶类转变为不溶性物质，以保持原有的结构与生活时相仿。另外，组织固定后，均呈一定的硬化状态，增加组织韧性，而且不易变形，有利于以后的组织处理。所以组织一旦离体必需及时固定，固定液的量应为组织的5倍。固定的关键主要与固定的及时性、固定液的选择、固定液的浓度、固定的温度和时间有关。最常用的固定液为10％福尔马林。笔者认为，10％福尔马林由于受到福尔马林的质量、使用时的挥发和取材时带入的水分影响，浓度被降低致组织固定不足，而高浓度的福尔马林，降低了对组织的穿透性，形成周围固定好而中央固定不到的现象。通过实践，本人认为以12～15％的福尔马林最佳。大标本（2cm厚）一般需要6～12个小时，小标本一般需要3～6个小时；当室温低18℃时，可在37℃以下的温箱内加温4～6个小时。由于HE染色最佳着色PH为3.5～4.5, 中性福尔马林对苏木素染色有一定影响,细胞核容易发灰,核染色质不佳。所以, 尽管中性福尔马林对抗原有很好的保存作用，但酸性福尔马林对绝大多数抗原来说也有很好的保存作用，所以在没有特别处理的情况下常规HE还是以12～15％酸性福尔马林为佳（每100毫升12～15％福尔马林液内加5毫升冰醋酸），而且酸性福尔马林的渗透速度比中性要快。骨髓、结缔组织固定以Bouin液为佳，经Bouin液固定后的组织必须流水冲洗4小时以上。有条件的单位可根据不同要求选用二种或二种以上的固定液；少数单位还可建立组织冷冻库，以便适应各种特殊的处理要求。

作者: liuyong 时间: 2002-10-30 10:59 标题: 固定

:em25: 从图片看，似乎酸性福尔马林比中性福尔马林对组织细胞的收缩更厉害。
两张图片比较，选择视野带有主观性。

作者: dingwei 时间: 2002-10-30 12:53 标题: 固定

主要看细胞核的着色和颜色对比。

作者: chenrong 时间: 2002-10-31 22:30 标题: 固定

引用:

下面引用由dingwei在 2002/10/30 12:53pm 发表的内容： 主要看细胞核的着色和颜色对比。

上图是不是肾小球啊?<酸的>是收缩的满多的.细胞核的着色和颜色比<中的>要好,但我想<中的>只要染的好一点应该会好的,至少我用<中的>染的满好的. :em17: :em17: :em02:

作者: dingwei 时间: 2002-10-31 23:06 标题: 固定

其实这是一种错觉，不是酸性的核收缩了，而是中性的因没固定好，细胞核发胖，这二张图并不是用来说明二种固定液最后的固定结果，是看二种固定液的固定速度，图下面都有2小时的注明。至于细胞收缩，酸性与中性没区别，不信你可以做一下试试，但核浆对比肯定不一样。

作者: zgp 时间: 2002-12-3 21:33 标题: 固定

丁老师你提到的组织冷冻库如何建立？病理组织能保存多长时间？

作者: fal 时间: 2002-12-3 21:40 标题: 固定

1、买一台-80度的低温冰箱，把新鲜组织用OCT胶包埋后存放。价格约为8-10万元。
2、买二只液氮罐，一只存放组织用，另一只运输液氮用。不过液氮易蒸发，要定期添加比较麻烦，无经费者可用本法。
建立了组织库后可做很多很多的“高级”工作，研究生必备啊！

作者: chenrong 时间: 2002-12-30 00:07 标题: 固定

我用了酸性的福尔马林后,发现有色素沉浊,不光有福尔马林色素沉浊还有其它的.同样的就没有.我想知道为什么. :em14: :em14:

作者: 广医病理科 时间: 2002-12-30 16:18 标题: 固定

丁老师：取材后，脱水机用酸性12-15%福尔马林固定液作用2H，然后转酒精脱水，可以吗？

作者: chenrong 时间: 2002-12-30 19:11 标题: 固定

引用:

下面引用由广医病理科在 2002/12/30 04:18pm 发表的内容：
丁老师：取材后，脱水机用酸性12-15%福尔马林固定液作用2H，然后转酒精脱水，可以吗？

要加一道水,起清洗作用. :em17: :em17:

作者: dingwei 时间: 2002-12-31 20:16 标题: 固定

如果是新鲜标本取材就不够，主要看你的组织脱水好不好，如果你的蜡块切面有血红色，或组织中间脱水不良（豆腐渣样），那固定时间肯定不够。

作者: chenrong 时间: 2003-1-7 17:18 标题: 固定

引用:

下面引用由回头一笑^o^在 2003/01/07 08:33am 发表的内容：
不太理解什么叫豆腐渣样蜡块，最好发张图片上来~~

可能是蜡的关系,使得蜡块有许多小洞吧,我是这么认为的.
:em17: :em17:

作者: dingwei 时间: 2003-1-7 22:18 标题: 固定

有，可用贴纸法，把载玻片间的纸用水打湿后粘在蜡块切片上，切一下，放入展片水中，可以切下来。

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