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标题: 请教丁老师关于冰冻问题 [打印本页]

作者: 梅花 时间: 2011-5-24 21:50 标题: 请教丁老师关于冰冻问题

丁老师，您说冰冻固定用甲醇好，可是我们科用甲醇固定染出来的片子核灰蒙蒙的，你们那儿会不会？丁老师，冰冻切片染色好的标准是以核接近石蜡切片为好还是核大些与细胞真正的形态相近好？我科用含甲醛的固定液，细胞较收缩。

作者: xkj2797xkj 时间: 2011-5-24 22:17

冒昧回答下，用95%酒精固定效果会很好！

作者: 梅花 时间: 2011-5-24 22:25

95%洒精固定也会蒙。

作者: xkj2797xkj 时间: 2011-5-24 22:59

那就要看你的染液是不是有问题了！

作者: dingwei 时间: 2011-5-25 07:59

片子核灰蒙蒙的，应该是你片子没有立即固定，细胞退变引起的。玻片粘上组织后，立即放入固定液，不能在空气中停留数秒。

作者: siliang420 时间: 2011-5-26 13:25

我觉得不应该立刻放入固定液，刚粘好的组织温度还在负的15度左右，而固定液的问题一般在十几度上下，所以要在空气中适当放置20秒钟左右，要不容易引起组织开裂等情况，若是想要直接放入固定液，个人建议最好将固定液的温度保持在4摄氏度左右，固定3分钟足矣。固定液最好是甲醇。

作者: dingwei 时间: 2011-5-26 16:27

在空气中放置20秒钟左右，的确会减少细胞间的收缩（如含水量高的组织：软组织肿瘤、脑组织等可以采用），但容易引起细胞的退变。立即放入固定液，不会引起组织开裂，4度固定液与室温固定后组织的收缩差异很小，用肉眼很难区分。因此大多数组织，只有立即固定，才能做出最有利于诊断的冰冻切片。

作者: Tony 时间: 2011-5-26 18:36

Carson博士讲最好用47%的甲醛

作者: xkj2797xkj 时间: 2011-5-26 21:17

本人做了个对照，冰冻时切好两张子宫肌瘤片子（一块组织），一张加固定液（95%酒精），另外一张不加固定液，染色出来，加固定液的颜色很清晰，上色很好，不加固定液的组织有些朦胧，伊红上色不是很好，所以，切好要马上固定！

作者: 梅花 时间: 2011-5-29 22:54

马上固定对间质成份多的组织容易引起脱片，95%乙醇固定也会朦，染液才用2周，常规切片还蛮好用的，应该没问题，明天我用更新的染液并立即固定，看结果如何，

作者: 梅花 时间: 2011-5-30 22:51

今天用使用1周的哈瑞氏苏木素染冰冻切片，95%乙醇固定，效果会更好，但是马上固定，对乳腺病、卵巢囊肿等细胞较稀疏的组织，我科经常出现脱片造成片子不完整，按丁老师说，不能在空气中停留数秒，但因为脱片的原因，我们不得不用电吹风稍吹几下才固定，不知同行们会不会出现脱片现象？

作者: dingwei 时间: 2011-5-31 08:07

冰冻切片脱片的原因主要是细胞成份少的组织：如胶原含量较高的组织、软骨组织等，如果切片厚就容易脱片。干燥后固定，尽管所谓的切片完整了，但这些脱的组织并无多少诊断价值，而真正诊断需要的细胞核却发生了退变。如何在细胞核不退变的情况下把这二种组织全部不脱，是解决问题应该思考的方向，而不是仅仅只是不脱片。
解决方法：
1、把片子切薄（5-6微米），切平整，99%的片子都不会脱，我们很少会有脱的片子。当然不是切片机刻度多少就是多少厚，刀要快，冷冻温度要适中，还要在切片技术上下一点功夫。
2、在95ml甲醇或95%乙醇内加5ml冰醋酸，可以减少脱片，特别如甲状腺胶质。
3、苏木素染色不要加热，一般室温1分钟即可。
4、玻片要干净，不要用手抓在需要粘组织的区域。
当然，干燥技术并非完全不能用，当组织含水量较高的组织：如脑组织、软组织肿瘤，如果立即固定，会使间质收缩成网状。此时，可以做二张切片，一张快速固定，诊断医生可以看细胞核的结构；另一张略干燥，可看完整的组织结构。

作者: 梅花 时间: 2011-5-31 22:53

我切5微米，苏木素室温染同常规时间，稍短些，不知怎么搞的，我这边95%乙醇加少量冰乙酸，核会朦的，因此我都不加，其他条件都一样，就是细胞成份少的组织会掉片，看来以后要按丁老师说的去做，切二片染给医生看，另外，再请教丁老师，哈瑞氏苏木素配好不用，用瓶子装起来，一个月内会有氧化膜吗，

作者: dingwei 时间: 2011-6-1 07:45

哈瑞氏苏木素配好不用，用瓶子装起来，一定会有氧化膜，这是正常的。

作者: 梅花 时间: 2011-6-1 22:36

谢谢丁老师，那吉尔苏木素也有吗，随着时间延长，即使不用，染色力也会减弱吗？

作者: dingwei 时间: 2011-6-2 07:59

只要有氧化就一定有，吉尔苏木素只是氧化剂不一样，氧化强度不一样，出现的时间不一样。随着存放时间的延长，着色力也越来越强，但时间过久后，苏木素过氧化，即使不用，染色力也会减弱，甚至不能用。

作者: 梅花 时间: 2011-6-2 22:58

谢谢丁老师！

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