硬组织（hard tissue）是生物体内通过生物矿化而形成的组织(如骨骼、牙齿等)。是介于无机物和有机物之间的特殊物质。硬组织具有如下特性：(1)在结构上高度有序。(2)矿物质在基质中形成并被包埋在基质中。(3)矿物质不仅在生物体代谢过程中形成而且参与代谢过程。

硬组织切片机广泛应用于各级医院，医学院校，生命科学，卫生防疫，公安法医，动物检疫，农科院校，科研机构等单位做骨组织切片，以及金属切片，如不脱钙的骨骼和牙齿及各种金属、非金属种植体，其坚固的结构，合理的设计，使得切割损耗小，能够保障切片的质量，是您做骨组织分析的首选设备。

目前能做硬组织切片的地方也有很多。上海舜田生物科技有限公司做的硬组织切片质量是相当不错的。上海舜田可以专业为您制作各种硬组织切片（如不脱钙骨骼、牙齿等）。切割后的组织保证不变形，并能精准地对组织形态进行计量学分析，便于观察荧光标记和图像采集，达到对切片厚度，平整度，光洁度等的要求。同时，为您提供原位杂交、免疫组化等后续服务。

  硬组织切片主要用于骨科、口腔科、材料学以及心血管搭桥的研究。上海舜田生物科技有限公司可以为您切割硬的组织（不脱钙骨骼和牙齿），甚至包含在其中的金属（钛合金），保证切割后保持组织不变形，能保障准确地进行组织形态计量学分析、观察荧光标记、图像采集。
该公司使用的切片机：
1.配置专用冷却液系统，可提高切片光洁度；
2.选配端面磨削装置，可提高切片上端面光洁度；
3.选配带磨头装置，可提高切片下端面光洁度；
4.能满足您对切片厚度、平整度、光洁度等的要求

溶液配制：
固定液（4%多聚甲醛）配制：
① 用电子称称取多聚甲醛40g；
② 配制1×PBS1000ml，并将40g多聚甲醛粉末溶于其中，放在电磁搅拌器上搅拌，逐渐加入NaOH直至完全溶解；
③ PH计指示下加入HCL调整PH值至7.2—7.4混匀后装入瓶中，放入4℃冰箱过夜后使用。

甲基丙烯酸甲酯单体配制：
纯单体（单体III）配制：
① 60g 氢氧化钾（KOH）溶解于1200ml三蒸馏水；
② 取出从市场购置的含有杂质的甲基丙烯酸甲酯液（MMA）400ml与上述KOH溶液400ml在分离瓶内混合震荡3分钟，静置10分钟分层后放出下层的溶液；
③ 再倒入分离瓶内上述的KOH溶液400ml，按上法震荡静置后放出下层液体，此步骤重复2次；
④ 再在分离瓶中加入400ml三蒸馏水，混合震荡3分钟，静置10分钟后放出下层所分离出含钾离子的三蒸馏水；该洗涤步骤重复2次；
⑤ 将分离瓶中MMA液倒入烧杯中，并加入50g无水硫酸铜；静置于4℃冰箱中；
⑥ 24小时后取出该溶液进行过滤；过滤出的液体即为纯单体溶液（单体III）。
4）单体II：为纯单体III浸泡标本后回收所得单体液
5）单体I：为单体II液浸泡过标本后回收得单体液

操作步骤：
1 标本固定
取骨组织标本，置于4%多聚甲醛进行组织固定，用于后期的硬组织切片分析。流水冲洗24小时。
2 标本脱水
按照以下过程对标本进行梯度脱水：
① 70%乙醇，24小时；② 75%乙醇，24小时；
③ 80%乙醇，24小时；④ 85%乙醇，24小时；
⑤ 90%乙醇，24小时；⑥ 95%乙醇，24小时；
⑦100%乙醇，24小时；⑧100%乙醇，24小时。
3 标本透明
使用纯二甲苯透明，总时间不超过4小时。
4 过滤及包埋
按如下程序对标本进行过滤包埋：
① 将透明后的标本放入单体I溶液中，浸泡18小时；
② 将单体I倒出后，放入单体II溶液，浸泡24小时；
③ 更换单体III溶液（即纯单体溶液），浸泡24小时；
④ 更换新的单体III溶液，并在包埋容器内加入少量纯单体硬化块；放置在负压真空器内，设置抽吸强度为2×104 Pa，抽真空时间约为4小时，以确保骨组织内气体完全排出；
⑤ 盖上瓶盖，并在瓶盖上预留一换气孔，放置于4℃冰箱内5天；
⑥ 然后放置在室温下继续聚合直至固化；
⑦ 固化后期，则放置于40℃烘箱内至其完全硬化；当使用克氏针刺戳表面时，如完全硬化且固化块内标本周围无气泡出现则表明包埋成功。
5 切片及磨片

将包埋的玻璃容器砸碎后，修整包埋块，使之在切片机上固定牢固，且使刀片切割方向与骨缺损长轴方向垂直，即沿失状面切割，切片厚度约为150 µm。尽量选取经过纤维多孔钛微球最大横截面的切片。超声清洗切片10秒后，双蒸水冲洗2分钟，常温下晾干，再使用黏合剂将切片粘合至硬组织专用的有机玻璃载玻片上（避免气泡产生），并使用5公斤砝码压片24小时。
  对硬组织切片进行手工磨片。先将切片在磨沙玻璃上磨片，然后分别用P300、P800、P1200砂纸进行磨片，将切片磨厚至50 µm；再使用专用绒布和精抛光氧化铝粉和三蒸水混合后进行抛光；至最终切片厚约30～40 µm。
6 染色方法
可用很多种方法，下面以VAN GIESON－苦味酸品红染色为例介绍。
其步骤如下：
① 超声洗片30秒，并双蒸水冲洗切片2分钟；
② 将切片放置在0.1％甲酸溶液中，3分钟；
③ 流水冲洗切片，2分钟；
④ 将切片放置20％甲醇溶液中，2小时；
⑤ 流水冲洗切片，2分钟；
⑥ 在60℃恒温水温箱内，进行Stevenol蓝染色，8分钟；
⑦ 在60℃三蒸水进行切片洗涤，2分钟，并擦干；
⑧ 室温下，将切片进行Van Gieson－苦味酸品红液染色，2分钟；
⑨ 使用100％乙醇液洗涤两次。