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标题: 硬组织切片概述 [打印本页]

作者: sunteam02    时间: 2011-6-7 09:38     标题: 硬组织切片概述

硬组织(hard tissue)是生物体内通过生物矿化而形成的组织(如骨骼、牙齿等)。是介于无机物和有机物之间的特殊物质。硬组织具有如下特性:(1)在结构上高度有序。(2)矿物质在基质中形成并被包埋在基质中。(3)矿物质不仅在生物体代谢过程中形成而且参与代谢过程。

硬组织切片机广泛应用于各级医院,医学院校,生命科学,卫生防疫,公安法医,动物检疫,农科院校,科研机构等单位做骨组织切片,以及金属切片,如不脱钙的骨骼和牙齿及各种金属、非金属种植体,其坚固的结构,合理的设计,使得切割损耗小,能够保障切片的质量,是您做骨组织分析的首选设备。

目前能做硬组织切片的地方也有很多。上海舜田生物科技有限公司做的硬组织切片质量是相当不错的。上海舜田可以专业为您制作各种硬组织切片(如不脱钙骨骼、牙齿等)。切割后的组织保证不变形,并能精准地对组织形态进行计量学分析,便于观察荧光标记和图像采集,达到对切片厚度,平整度,光洁度等的要求。同时,为您提供原位杂交、免疫组化等后续服务。

  硬组织切片主要用于骨科、口腔科、材料学以及心血管搭桥的研究。上海舜田生物科技有限公司可以为您切割硬的组织(不脱钙骨骼和牙齿),甚至包含在其中的金属(钛合金),保证切割后保持组织不变形,能保障准确地进行组织形态计量学分析、观察荧光标记、图像采集。
该公司使用的切片机:
1.配置专用冷却液系统,可提高切片光洁度;
2.选配端面磨削装置,可提高切片上端面光洁度;
3.选配带磨头装置,可提高切片下端面光洁度;

4.能满足您对切片厚度、平整度、光洁度等的要求

溶液配制:
固定液(4%多聚甲醛)配制:
用电子称称取多聚甲醛40g;
配制1×PBS1000ml,并将40g多聚甲醛粉末溶于其中,放在电磁搅拌器上搅拌,逐渐加入NaOH直至完全溶解;
PH计指示下加入HCL调整PH值至7.2—7.4混匀后装入瓶中,放入4℃冰箱过夜后使用。

甲基丙烯酸甲酯单体配制:
纯单体(单体III)配制:
60g 氢氧化钾(KOH)溶解于1200ml三蒸馏水;
取出从市场购置的含有杂质的甲基丙烯酸甲酯液(MMA)400ml与上述KOH溶液400ml在分离瓶内混合震荡3分钟,静置10分钟分层后放出下层的溶液;
再倒入分离瓶内上述的KOH溶液400ml,按上法震荡静置后放出下层液体,此步骤重复2次;
再在分离瓶中加入400ml三蒸馏水,混合震荡3分钟,静置10分钟后放出下层所分离出含钾离子的三蒸馏水;该洗涤步骤重复2次;
将分离瓶中MMA液倒入烧杯中,并加入50g无水硫酸铜;静置于4℃冰箱中;
24小时后取出该溶液进行过滤;过滤出的液体即为纯单体溶液(单体III)。
4)单体II:为纯单体III浸泡标本后回收所得单体液
5)单体I:为单体II液浸泡过标本后回收得单体液

操作步骤:
1 标本固定
取骨组织标本,置于4%多聚甲醛进行组织固定,用于后期的硬组织切片分析。流水冲洗24小时。
2 标本脱水
按照以下过程对标本进行梯度脱水:
70%乙醇,24小时; 75%乙醇,24小时;
80%乙醇,24小时; 85%乙醇,24小时;
90%乙醇,24小时; 95%乙醇,24小时;
100%乙醇,24小时;100%乙醇,24小时。
3 标本透明
使用纯二甲苯透明,总时间不超过4小时。
4 过滤及包埋
按如下程序对标本进行过滤包埋:
将透明后的标本放入单体I溶液中,浸泡18小时;
将单体I倒出后,放入单体II溶液,浸泡24小时;
更换单体III溶液(即纯单体溶液),浸泡24小时;
更换新的单体III溶液,并在包埋容器内加入少量纯单体硬化块;放置在负压真空器内,设置抽吸强度为2×104 Pa,抽真空时间约为4小时,以确保骨组织内气体完全排出;
盖上瓶盖,并在瓶盖上预留一换气孔,放置于4℃冰箱内5天;
然后放置在室温下继续聚合直至固化;
固化后期,则放置于40℃烘箱内至其完全硬化;当使用克氏针刺戳表面时,如完全硬化且固化块内标本周围无气泡出现则表明包埋成功。
5 切片及磨片

将包埋的玻璃容器砸碎后,修整包埋块,使之在切片机上固定牢固,且使刀片切割方向与骨缺损长轴方向垂直,即沿失状面切割,切片厚度约为150 µm。尽量选取经过纤维多孔钛微球最大横截面的切片。超声清洗切片10秒后,双蒸水冲洗2分钟,常温下晾干,再使用黏合剂将切片粘合至硬组织专用的有机玻璃载玻片上(避免气泡产生),并使用5公斤砝码压片24小时。
  对硬组织切片进行手工磨片。先将切片在磨沙玻璃上磨片,然后分别用P300、P800、P1200砂纸进行磨片,将切片磨厚至50 µm;再使用专用绒布和精抛光氧化铝粉和三蒸水混合后进行抛光;至最终切片厚约30~40 µm。
6 染色方法
可用很多种方法,下面以VAN GIESON-苦味酸品红染色为例介绍。
其步骤如下:
超声洗片30秒,并双蒸水冲洗切片2分钟;
将切片放置在0.1%甲酸溶液中,3分钟;
流水冲洗切片,2分钟;
将切片放置20%甲醇溶液中,2小时;
流水冲洗切片,2分钟;
在60℃恒温水温箱内,进行Stevenol蓝染色,8分钟;
在60℃三蒸水进行切片洗涤,2分钟,并擦干;
室温下,将切片进行Van Gieson-苦味酸品红液染色,2分钟;
使用100%乙醇液洗涤两次。






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