蛋白质印迹（Western blotting）又称免疫印迹（immunoblotting），缩写为WB，是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。

可以提供免疫印迹技术服务的公司很多，上海舜田生物科技有限公司的服务质量相对是比较好的，而且服务质量和周期都能得到保证。上海舜田生物提供全套的免疫印迹技术服务，对蛋白进行定量和半定量分析。全部实验使用优质试剂，完全确保实验质量，客户只需提供标本和一抗（或通过舜田购买），舜田提供完整的实验资料和结果。

1. 蛋白质抽提

a.实验对象为组织样品，取适量（250~500mg）新鲜组织样品或正确保存的组织样品，加1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂（或核蛋白抽提试剂），匀浆后抽提总蛋白（或核蛋白）。

b.实验对象为细胞样品，每份样品取1×106～1×107细胞，PBS清洗细胞，去PBS加0.1ml~1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂（或核蛋白抽提试剂）抽提总蛋白（或核蛋白）。

2. 蛋白质定量

按KCTMBCA蛋白质定量试剂盒操作说明操作，测定样品浓度。

3. 变性聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳(SDS-PAGE)

将准备好的样品液和生物素标记的蛋白质分子量标准分别上样，标准加进第一个孔中，电泳分离蛋白。

4. 蛋白质转移到硝酸纤维膜或PVDF膜

按Bio-Rad蛋白转移装置说明组装滤纸凝胶纤维素夹层，30mA恒流条件下，4°C转移过夜。

5. 膜的封闭和抗体孵育

a．膜在5％BSA溶液中室温孵育1小时以封闭膜上的非特异结合。

b.封闭过的膜加入一级抗体室温孵育1.5小时，抗原抗体结合。

c.加入HRP标记的二级抗体以结合一级抗体及HRP标记的抗生物素抗体以结合分子量标准，室温孵育膜1小时。加入HRP标记的GAPDH抗体可同时检测GAPDH含量。。

6. 结果检测

化学发光法检测，膜与化学发光底物孵育，经X胶片曝光显影。图片扫描保存为电脑文件，并用ImageJ分析软件将图片上每个特异条带灰度值的数字化。

7. 数据分析

目的蛋白的灰度值除以内参GAPDF的灰度值以校正误差，所得结果代表某样品的目的蛋白相对含量。

8. 提供实验报告

包括详细的实验方法及免疫印迹实验结果的相关图表。。

应用：
1.目的蛋白的表达特性分析
2.目的蛋白与其他蛋白的相作
3.目的蛋白的组织定位
4.目的蛋白的表达量分析