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标题: 免疫组化有在用浓缩型抗体吗 [打印本页]

作者: HHXX 时间: 2011-6-22 16:49 标题: 免疫组化有在用浓缩型抗体吗

我们科免疫组化有些一抗开的很少，用不完就过期了，想试下浓缩型抗体，会不会好点？

作者: dingwei 时间: 2011-6-23 07:53

肯定浓缩型抗体好，保存时间长，可根据实际情况自己调整稀释比，我们一直用。

作者: myzh 时间: 2011-6-23 11:50

浓缩型抗体怎么日常保存比较好

作者: HHXX 时间: 2011-6-23 12:50

谢谢！浓缩型的抗体可以保存3年吗？我们免役组化量还不算多。

作者: myzh 时间: 2011-6-24 22:56

直接放冰箱冷藏室里还是要冻存呢

作者: shanghainese 时间: 2011-6-26 00:02

浓缩型的抗体(purified antibody)用1%牛血清白蛋白(bovine serum albumin;BSA),0.09%叠氮钠的磷酸缓冲液(PBS)稀释成10~50ug/mL 浓度。在聚丙烯小管分装成10uL，放在负80度冻箱里长期保存。

作者: promotion 时间: 2011-6-27 15:27

不要说一抗，二抗都有浓缩液

作者: promotion 时间: 2011-6-27 15:29

引用:

原帖由 shanghainese 于 2011-6-26 00:02 发表
浓缩型的抗体(purified antibody)用1%牛血清白蛋白(bovine serum albumin;BSA),0.09%叠氮钠的磷酸缓冲液(PBS)稀释成10~50ug/mL 浓度。在聚丙烯小管分装成10uL，放在负80度冻箱里长期保存。

瓶口要封好，时间长了液体会消失的

作者: promotion 时间: 2011-6-27 15:33

引用:

原帖由 HHXX 于 2011-6-22 16:49 发表
我们科免疫组化有些一抗开的很少，用不完就过期了，想试下浓缩型抗体，会不会好点？

数量少用浓缩液不一定好，一你要定稀释比例，二用冰箱中的浓缩液，时间长了，活性降低，稀释比例又有变化，重新做，定稀释浓度，很繁的，如果还是按照以前的比例，对病人有不负责的嫌疑！故建议还是用工作液，可以1ml或1.5ml一定。

作者: dingwei 时间: 2011-6-27 16:54

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原帖由 promotion 于 2011-6-27 15:33 发表
数量少用浓缩液不一定好，一你要定稀释比例，二用冰箱中的浓缩液，时间长了，活性降低，稀释比例又有变化，重新做，定稀释浓度，很繁的，如果还是按照以前的比例，对病人有不负责的嫌疑！故建议还是用工作液，可以1m ...

我正好与这种观点相反，数量少才应该用浓缩液：即用型抗体保存时间长了，效价就会降低，你根本不知这抗体配好后在公司里放了多少时间，也不知道那天开始结果有差异了，而且有了差异还没有办法解决。而浓缩液抗体，本身比较稳定，保存时间较长，如果发现稀释度有变化，就应该调整，我们不能怕麻烦而不管质量。用量大有单位，买来后一二个月内用完，即用型反而可以用。不管用什么，如果只懂机械地操作，都是对病人的不负责，这种也不叫技术，只是操作工。

作者: shanghainese 时间: 2011-6-28 11:49

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原帖由 dingwei 于 2011-6-27 16:54 发表

我正好与这种观点相反，数量少才应该用浓缩液：即用型抗体保存时间长了，效价就会降低，你根本不知这抗体配好后在公司里放了多少时间，也不知道那天开始结果有差异了，而且有了差异还没有办法解决。而浓缩 ...

作者: flyaqmt 时间: 2011-6-28 12:10

我们病理科有位老师做实验，他的抗体曾经放了五年（冷藏），结果也能用。反复冻融对抗体不好，放冷藏与放冷冻到底有没有区别，没做过实验。

作者: dingwei 时间: 2011-6-28 15:27

浓缩型抗体一般不需要冷冻，只要4度冷藏就可以了。反复冻融对抗体不好（国内会有各种原因引起停电都会引起冻融）。

作者: HHXX 时间: 2011-6-28 18:39

谢谢大家分享，这下更有信心了，我先换一部分浓缩型的试试

作者: promotion 时间: 2011-6-30 15:15

引用:

原帖由 dingwei 于 2011-6-28 15:27 发表
浓缩型抗体一般不需要冷冻，只要4度冷藏就可以了。反复冻融对抗体不好（国内会有各种原因引起停电都会引起冻融）。

浓缩型抗体要冷冻，你放在冷藏中半年试试！工作液只要4度冷藏，一般放半年没有问题

作者: promotion 时间: 2011-6-30 15:20

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原帖由 dingwei 于 2011-6-27 16:54 发表

我正好与这种观点相反，数量少才应该用浓缩液：即用型抗体保存时间长了，效价就会降低，你根本不知这抗体配好后在公司里放了多少时间，也不知道那天开始结果有差异了，而且有了差异还没有办法解决。而浓缩 ...

用量大的医院几乎都买浓缩液，只有用量少的医院才买工作液的。如果用量少的医院买浓缩液，过一段时间就调稀释浓度，消耗的原材料成本就会让病理科的主任无法承受的

作者: promotion 时间: 2011-6-30 15:34 标题: 回复 10# 的帖子

现在大医院对病理质量都非常重视，同一片子上都跟剃度组织（阴性，+，++，+++），而不是仅仅做一个病人的组织，这样一做，马上可以知道该即用型试剂活性是否达到要求，第二也能明确病人的组织病变程度了，浓缩液就要先专门做滴定，调比例，非常不适合小医院。

作者: weili1027 时间: 2011-7-28 21:31

大家各抒己见

作者: dingwei 时间: 2011-8-4 14:01

引用:

原帖由 promotion 于 2011-6-30 15:15 发表
浓缩型抗体要冷冻，你放在冷藏中半年试试！工作液只要4度冷藏，一般放半年没有问题

我们的浓缩液在4度冰箱保存最长时间的是16年，是老教授从美国带回来的，效果一直很好，效价也基本没有降低，其中有一部分用低温冷冻保存，由于国内经常停电，效果反而没有冷藏的好。我们所有抗体都有在4度冰箱冷藏，大多数抗体都在2-4年。这方法已经做了二十余年，效果一直很稳定。

作者: dingwei 时间: 2011-8-4 14:03

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原帖由 promotion 于 2011-6-30 15:20 发表
用量大的医院几乎都买浓缩液，只有用量少的医院才买工作液的。如果用量少的医院买浓缩液，过一段时间就调稀释浓度，消耗的原材料成本就会让病理科的主任无法承受的

我想你没有用过浓缩液，因为你并不知道浓缩液的稳定性。

作者: dingwei 时间: 2011-8-4 14:12

引用:

原帖由 promotion 于 2011-6-30 15:34 发表
现在大医院对病理质量都非常重视，同一片子上都跟剃度组织（阴性，+，++，+++），而不是仅仅做一个病人的组织，这样一做，马上可以知道该即用型试剂活性是否达到要求，第二也能明确病人的组织病变程度了，浓缩液就要 ...

免疫组化结果在中国真正合格的单位不到20%，包括大医院，也许很多人都认为自己做得很好，我们浙江省做质量控制很多年，但免疫组化还是存在很大问题，真正合格的也不多，大都是凭自己的经验认为这做出来有颜色就是正确的。就连我们做出来也有些抗体的结果存在问题。这不仅仅与抗体的浓度、质量有关，很大一部份与组织的固定、脱水以及免疫组化的操作等有关，变化的因素太多，所以，要做免疫组化质控说说很简单，但做起来非常困难，要求每一个环节都要很规范。不是简单的滴几滴、做几张片就知道好与不好。

作者: flyaqmt 时间: 2011-8-4 14:26

引用:

原帖由 dingwei 于 2011-8-4 14:12 发表
免疫组化结果在中国真正合格的单位不到20%，包括大医院，也许很多人都认为自己做得很好，我们浙江省做质量控制很多年，但免疫组化还是存在很大问题，真正合格的也不多，大都是凭自己的经验认为这做出来有颜色就是正 ...

我同意丁老师的观点，现在免疫组化室间质内质控真正严格执行的没有几家

作者: promotion 时间: 2011-8-5 11:39

引用:

原帖由 dingwei 于 2011-8-4 14:03 发表
我想你没有用过浓缩液，因为你并不知道浓缩液的稳定性。

用了很长时间了，现在上了自动染色仪，全部买浓缩液了

作者: promotion 时间: 2011-8-5 11:43

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原帖由 dingwei 于 2011-8-4 14:01 发表
我们的浓缩液在4度冰箱保存最长时间的是16年，是老教授从美国带回来的，效果一直很好，效价也基本没有降低，其中有一部分用低温冷冻保存，由于国内经常停电，效果反而没有冷藏的好。我们所有抗体都有在4度冰箱冷藏， ...

丁老师厉害了！免疫组化在九十年代初在中国的研究所、医学院开始由学科带头人做点试验，在医院的病理科运用也就十年左右，在医学院用时是从西德进口的，那时的辅料全是自己配的

作者: promotion 时间: 2011-8-5 11:46

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原帖由 flyaqmt 于 2011-8-4 14:26 发表

我同意丁老师的观点，现在免疫组化室间质内质控真正严格执行的没有几家

没有资格申请三甲的

作者: dingwei 时间: 2011-8-5 14:14

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原帖由 promotion 于 2011-8-5 11:43 发表
丁老师厉害了！免疫组化在九十年代初在中国的研究所、医学院开始由学科带头人做点试验，在医院的病理科运用也就十年左右，在医学院用时是从西德进口的，那时的辅料全是自己配的

我们在88年开始学做免疫组化，真正开始做是90年，那时只有十来只抗体，都是通过医学院从美国进口，只有1ml原液装，稀释比大都是1：1000到5000，最大的能到1：15000，片子又少，要用几年？所以在如何保存上的确没主意，没经验，冷冻和冷藏我们都试。后来能在中国买到抗体也只有上海华美一家，能买到0.1ml原液，哈哈那时他们很牛的，买抗体要自己带冰壶，到他们门店买，还要一手交货一手交钱，不打折，不邮寄，连几元钱的冰壶也不送。免疫组化做得早不等于做得好，很多问题我们现在还没办法稳定。做质控很多单位都做，所谓的做很多地方都是做做样子，真正要做质控是每一张（所有的）切片边上应该粘一张此抗体阳性、强阳性和弱阳性的对照组织，也就是你说的“同一片子上都跟剃度组织（+，++，+++）”，只有这样，才知道你这例切片做得是不是真的正确，才能找出除抗体原因外由于组织差异导致的染色强度表达上的差异，然后再针对这例单独调整稀释比。相信全中国没有一家是有这么做的，因为这样非常的麻烦，也没有这么多的阳性组织，我们目前根本做不到。很多所谓阳性对照都是选择强阳性或正常组织，最终只能证明你的操作是正确的，但不代表你的抗体浓度是正确的。不过那怕就是拿强阳性组织或正常做对照，能做到每天每一张都做，又有几家？三甲医院并不代表三甲的水平，大家都在应付检查，都在造假，没有一家是真三甲，检查与不检查一个样，那家能做到？中国免疫组化规范化才刚刚起步，还要走很多的路。

作者: promotion 时间: 2011-8-5 16:38 标题: 回复 26# 的帖子

我知道，上海的几家大医院都在每一张（所有的）切片边上粘一张此抗体强阳性、阳性、弱阳性和阴性的对照组织，这四样组织放在同一蜡块中，切片，平时做了很多准备工作，非常不错的。
而且用自动染色仪后，效果比手工好多了，我是怀疑设备的辅料中有二抗增强剂的，手工用目前国内最好的二抗（葡萄串式多聚体二抗）效果也没有它强。

作者: promotion 时间: 2011-8-5 16:42

88年那真是早了，最早和免疫试剂交易打交道的老胡，现在到上海太阳去了。

作者: dingwei 时间: 2011-8-5 20:45

引用:

原帖由 promotion 于 2011-8-5 16:38 发表
我知道，上海的几家大医院都在每一张（所有的）切片边上粘一张此抗体强阳性、阳性、弱阳性和阴性的对照组织，这四样组织放在同一蜡块中，切片，平时做了很多准备工作，非常不错的。
而且用自动染色仪后，效果比手工 ...

这样做非常的好，上海的大医院也只有少量的抗体是这样做的，并不是全部。

作者: 病理小生 时间: 2011-11-22 17:15

有差距啊

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