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标题: 中性缓冲福马林正确的配方 [打印本页]

作者: ly97105 时间: 2011-7-20 14:20 标题: 中性缓冲福马林正确的配方

丁老师，你好：我是山东的，有幸在济南听过你讲课。我想问一下，我们科想换10%中性福尔马林固定液，关于它的配制，我想请教一下丁老师，书上写的是：40%甲醛100ml，无水磷酸氢二钠6.5g、磷酸二氢钠4g 、蒸馏水900ml。网上说的是：40%甲醛120ml，无水磷酸氢二钠13g、磷酸二氢钠4g 、蒸馏水880ml。我应该按照那个进行配制。还有能用自来水代替蒸馏水吗？

作者: luo 时间: 2011-7-20 15:06

用自来水就是去了意义，主要是控制固定液的PH值得。

作者: dingwei 时间: 2011-7-21 09:14

国外的配方：40%甲醛100ml，无水磷酸氢二钠6.5g、磷酸二氢钠（1水）4g 、蒸馏水900ml。国内也有很多人使用这配方。这个配方在没有加甲醛前，缓冲液的pH值为7.0左右，但加了甲醛后pH值为6.7左右，因此，需要用当量NaOH来调pH值。
而按40%甲醛100ml，无水磷酸氢二钠13g、磷酸二氢钠（1水）4g 、蒸馏水900ml配，加甲醛后，pH为7.0。
到底那个配方正确，我想，既然要中性，而且要缓冲好，可能还是后面这个配方更好一点。

作者: 淡若水 时间: 2011-7-21 18:51

请教丁伟老师
这样配好的中性福尔马林，可以保存多久？
我也想换成中性福尔马林，但是人手少。如果一次多配点，就简单多了。
谢谢！

作者: dingwei 时间: 2011-7-21 20:59

不清楚，我想如果容器密封，半年总没问题。

作者: llj19971997 时间: 2011-7-22 18:27

学习了！前段时间自己弄小动物的组织有的不是很好。调了时间还是不好。听了有经验的老师说是我固定不对。我平时用的是多聚甲醛，固定24H。
老师说我最好用中性甲醛。

作者: LINHU5555 时间: 2011-7-22 23:40

如果没有加入无水磷酸氢二钠和磷酸二氢钠（1水）配制的4%的甲醛液是什么属性（酸性还是中性）

作者: 刹那公子 时间: 2011-7-23 11:02 标题: 回复 8# 的帖子

如果是自来水配制，南北方存有水质的酸碱性的差异。

作者: 鱼的眼泪 时间: 2011-7-23 23:03 标题: 请问丁老师

所有的组织都有必要用中性缓冲福马林吗？还是一部分，比如淋巴结之类的才用？

作者: histotechnology 时间: 2011-7-24 08:22 标题: 回复 5# 的帖子

histotechnology这本书上有每种试剂的有效期，10%NBF至少6个月。

作者: dingwei 时间: 2011-7-26 13:58

中性缓冲福马林固定的目的是为了更好地保存抗原和DNA，对HE切片来说，中性缓冲福马林不是好的固定液，酸性福马林固定后颜色更鲜艳。如果明白了这个道理，就知道应该用什么固定。如果仅仅是做HE切片（如科研，只要看形态），不需要用中性缓冲福马林固定，而常规病理，就应该用中性缓冲福马林。没有加缓冲液是普通10%福马林，也有人称酸性福马林。

作者: xkj2797xkj 时间: 2011-7-27 01:16

甲醛原液存放过久，会有白色沉淀—副醛生成，这种溶液中有甲酸产生，使溶液变为酸性。酸性甲醛可影响细胞核着色。
所以是不能用酸性甲醛固定组织的！酸性福马林固定后颜色更鲜艳的说法原则上是不对的！

[ 本帖最后由 xkj2797xkj 于 2011-7-27 01:22 编辑 ]

作者: dingwei 时间: 2011-7-27 08:09

引用:

原帖由 xkj2797xkj 于 2011-7-27 01:16 发表
甲醛原液存放过久，会有白色沉淀—副醛生成，这种溶液中有甲酸产生，使溶液变为酸性。酸性甲醛可影响细胞核着色。
所以是不能用酸性甲醛固定组织的！酸性福马林固定后颜色更鲜艳的说法原则上是不对的！

甲醛原液存放过久（一般要1年以上），才会有白色沉淀—副醛生成。而我们说的酸性福马林固定，一般都是配好后就使用，使用时间也不会太长，不存在有甲酸产生，就是有也是微量。当然如果是长时间固定（如需要固定几年的标本）酸性的确不好。福马林固定精典的配方：AF液、AAF液、Helly液等都是酸性福马林液。酸性福马林起作用的不仅仅是pH，主要是加入酸的固定作用（如冰醋酸、重铬酸）。你可以使用中性和酸性二种固定液固定后的组织，切完片染色一下，做一个对照，看看那个鲜艳就清楚了。

作者: xkj2797xkj 时间: 2011-7-27 22:32

引用:

原帖由 鱼的眼泪 于 2011-7-23 23:03 发表
所有的组织都有必要用中性缓冲福马林吗？还是一部分，比如淋巴结之类的才用？

也不一定了，只是说最好用中性缓冲甲醛固定！

作者: dingwei 时间: 2011-7-28 07:46

中性缓冲甲醛固定是针对免疫组化和分子病理说的，并非为了HE切片。现在由于大量的病例都有可能做免疫组化和分子病理，特别是淋巴瘤、乳腺癌、胃癌、软组织等肿瘤，需要这些手段证实或靶向治疗，所以所有都必须使用中性缓冲甲醛固定，因为你事先并不清楚这块组织一定是什么疾病。

作者: 刘帮东 时间: 2011-12-5 17:16

我们科使用PBS，蒸馏水，甲醛来配中性固定液，请指教！~

作者: 郭建红 时间: 2011-12-5 19:30

我们常规就是中性福尔马林缓冲液，因为一部分组织要做免疫组化和分子病理。

作者: xkj2797xkj 时间: 2011-12-5 20:45

引用:

原帖由 刘帮东 于 2011-12-5 17:16 发表
我们科使用PBS，蒸馏水，甲醛来配中性固定液，请指教！~

浓甲醛10ml，0.01M pH7.4 PBS 90ml这个方法很好！这还是国外推荐的免疫组化通用固定液！

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