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标题: 免疫组化设置对照试验 [打印本页]
作者: xiaomin    时间: 2011-8-21 14:27     标题: 免疫组化设置对照试验

今天看到了这个，贴在这里共大家参考，请大家帮忙分析，临床病理免疫组化，必须要设置什么对照试验
一、阳性对照
用已证实含用待测抗原的组织，与待检标本做同样处理后，进行免疫组化染色，结果应为阳性，称为阳性对照。每次实验都应做阳性对照，通过阳性对照可证明靶抗原有一定活性，染色过程中各个步骤以及所用的试剂都合乎标准，染色方法可靠。特别是当待检的标本为阴性结果时，阳性对照呈阳性反应，可排除待检标本假阳性的可能。所以若预期染色结果是阴性时，就必须设阳性对照。
二、阴性对照
用确知不存在待检抗原的组织切片染色，结果为阴性。阴性对照可证实组织内若不含靶抗原，就不应染色，可排除在染色过程中由于非特异性染色或交叉反应等因素造成的“假阳性”结果。
三、空白对照
是最常用的对照，用不加一抗的缓冲液，如PBS替代一抗，染色结果应为阴性，说明染色方法可靠，可排除组织的内源性过氧化物酶、碱性磷酸酶、自发荧光等物质引起的非特异性显色。
四、替代对照
用与第一抗体来源的同一动物免疫前血清，如第一抗体用的是兔抗人GFAP的IgG抗体，对照中用非免疫性的正常IgG血清来替代一抗，以相同的稀释倍数进行对照染色。这可证明待检切片中阳性结果不是抗体以外混杂的血清成分所致，而是所用特异性抗体与组织细胞内待检抗原的特异性反应的结果。但使用的商品抗体往往不能用同一种动物的免疫前血清做替代对照，也可用未经免疫的同种动物血清，即非免疫血清替代一抗。
五、吸收试验对照
用过量已知相应的纯化抗原与第一抗体反应，抗体结合点全部被抗原结合，这种被抗原吸收的抗体不能再与组织内的抗原反应，故再做免疫组化染色时，结果应为阴性。
六、自身对照
用同一组织切片上与待检抗原无关的其它结构做对照。阴性反应与阴性结构同在一个视野中，相互印证，这本身就是对阳性反应的特异性对照。但进行科研工作中，单纯用这种对照是不科学的。必须增加如空白对照、替代对照等，才能使染色结果得到承认。现代国际上发表文章，一般在免疫组化染色的同时，还须有Western blotting做相应蛋白质检测的实验结果加以证实。
作者: dingwei    时间: 2011-8-22 08:32

1、阳性对照是必须的。
2、阴性对照不是很有必要，你不可能做的片子所有片子整片都是阳性的。
3、如果你是用非生物素二抗，就没必要做空白对照。
4、替代对照， 吸收试验对照不做。
5、自身对照是组织内本身有的，阳性就明你的操作是正确的。
作者: xiaomin    时间: 2011-8-22 13:06

谢谢丁老师的解答
作者: flyaqmt    时间: 2011-8-22 17:19

免疫组化每一个抗体每次都做阳性对照？
作者: dingwei    时间: 2011-8-22 19:29

从质量控制角度是这样的，但我们现在做不到。
作者: xkj2797xkj    时间: 2011-8-23 23:44

对，理论是这样，但是实际不然！
作者: dingwei    时间: 2011-8-29 10:07

理论是这样，实际也是这样。只是我们都很随意，真有问题也发现不了。
作者: shanghainese    时间: 2011-8-30 21:35

引用:
原帖由 dingwei 于 2011-8-29 10:07 发表
理论是这样，实际也是这样。只是我们都很随意，真有问题也发现不了。
作者: lzhgt    时间: 2012-4-16 12:23

是否包括抑制对照。
作者: lzhgt    时间: 2012-4-16 13:53

请教以下网站回答正确否：http://www.med66.com/html/ziliao/yixue/6/d10cd8e113ac42d56c6841377e2c82dd.htm免疫组化染色中的对照片的设置非常重要，它是判断您的染色是否成功的关键依据，而且也是检测每一个抗体的质量标准，常设的对照如下：自身对照、阴性对照（空白对照、替代对照、抑制对照、 吸收实验对照）、阳性对照。
A、自身对照：在同一切片上与检测的目的物对照比较。如Actin、CD34在正常组织中的血管壁肌层应为阳性，Vimentin可以间质细胞，Desmin以血管壁及肌束为对照，S-100以小神经末为对照等，如果应为阳性的组织是阳性，则技术操作正确，如为阴性，则表明技术或免疫试剂质量有问题。
B、空白对照：用缓冲液替代一抗。
C、替代对照：用非免疫血清替代一抗。
D、抑制对照：使用与一抗相同的非标记抗体稀释特异性一抗，适于直接法。
E、吸收实验对照：已知抗原与相应的第一抗体混合，发生结合沉淀，再用此沉淀抗体复合物进行免疫组化实验，结果为阴性。
F、阳性对照：用以含有靶抗原的切片进行对照。

[ 本帖最后由 lzhgt 于 2012-4-16 13:56 编辑 ]
作者: myzh    时间: 2012-6-7 23:02     标题: 标题

阳性对照选抗体有讲究吗，哪种一抗好。
作者: 新手妈妈    时间: 2012-6-21 23:40

个人觉得上机做阳性对照还可以，反正不会浪费试剂，就是麻烦些，好处就是有了阳性对照，医生对我们结果就基本没有什么质疑了。手工做，一张玻片做两种抗体，很难再做阳性对照，一般就看内对照，我们医生会尽量选有内对照的蜡块。
作者: 新手妈妈    时间: 2012-6-21 23:42

请教各位老师，你们手工的阳性对照是怎么做的？



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