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标题: 一名技术员的忏悔 [打印本页]

作者: 格言 时间: 2011-8-23 00:33 标题: 一名技术员的忏悔

干病理技术差不多将近3年，而做免疫组化算算应该有一年多点的时间，在之前几个月一直都是跟着老师一起做，做出来结果都还好，也挺稳定的，后来就自己单独做，每一批片子出来自己都会先看看抗体的表达定位是否正确，不太明白的地方就问诊断的医师，结果反馈一直都是还可以，没什么不对的地方。直到前几个月，碰到了让我大惑不解的问题，所有的操作步骤都是跟以前一样没有变化，但是结果出来就是有些抗体应该表达的没有表达，有的肿瘤组织Ki-67竟然是阴性的，要么就是表达的很弱（主要是要用EDTA修复的抗体），面对这种情况，就把以前的表达很好的阳性片找出来再次做对照做了一遍，结果依旧如此，最近做出的就是不表达或很弱，反复找原因，始终不得其解，原因出在哪，不明白，再想是不是跟二抗有关系（因为我们的一抗是两家公司的），后来就同时买了两家公司的二抗，在操作时，就配套的使用同一家公司的试剂，做出来后，结果依旧不满意，说明跟二抗是没有关系的。左思右想是不是跟固定有关系，打电话到制剂室去核对中性福尔马林的配方，发现制剂室中性福尔马林的配方是用国外的配方，我想这个按理说影响也不大呀，因为以前一直都是用这个配方，不也做出来了吗，原因肯定也不在这。面对每次的组化的结果，每次都是那几种抗体（需用EDTA修复的）都是做不出来，要么就是表达很弱，我迷惑了好久，始终想不出原因到底出在哪里，操作跟以前都是一样呀，该找的原因都找了，到底是什么原因，真的让人头疼。。直到前两个星期，自己脑子闪了下，是不是该考虑下烤片的温度和时间呢，之前是用65度烤4小时或者过夜（因为我们的医师有时开出的组化总是下午很晚，所以等我们切完就快下班了，只好把片子放入烤箱过夜）。后来就调整试着把所有的片子用62度烤2.5小时，结果出来，主任告诉我，说这批的免疫组化做的很好，该表达的都表达了，定位很准确，以前没做出来的这次也都做出来了，听到这话后，我欣喜了半天，反复的看了看片子，真的做出来了。接着后面的片子就一直都是62度烤2.5小时，近来的片子一切表达正常。我想我终于找到了原因，问题就在烤片的温度和时间上。然而，这两个星期我一直都在反思，在想一个问题，问什么不早点想到烤片温度的问题呢，这是一个再简单不过就可以解决的问题，竟然兜了这么一大圈，真觉得自己挺笨的，为什么不早点往这方面想，那样也就不会到现在才解决，一直都是在耿耿于怀。。。我想通过这件事情，我不得不说，做一名技术员不是简单地跟着老师学就可以了，也不是所有的老师操作就是规范的，一味着按部就班或许在短时间内不会出现问题，但时间长了，我想，肯定会有这样或那样的问题，会有更多需要自己去解决的事，所以只有自己不断的学习，学习规范化的操作，学习新的知识，才能够知道自己到底操作的规不规范，还要多思考，要多想做的每件事，为什么是这样，而不是做完就不管，不管结果。同时还要多实践，多摸索，多总结，唯有这样，才能让自己有进步，才能跟的上科学的步伐，才能做名合格的技术员。

作者: dingwei 时间: 2011-8-23 16:39

非常欣赏这样的钻研精神。不过实检还有一个漏洞：希望同一蜡块切二张白片，一张烤二小时，一张烤过夜，然后一起做试一下，多做几例，看看结果再下结论。

作者: 宁静致远 时间: 2011-8-23 17:20

我原来也是认为做好病理技术很简单，随着时间的推移和自己深入的学习，我才知道要学的东西太多，真的需要不断总结钻研，才能进步和提高自己！

作者: 格言 时间: 2011-8-23 18:57 标题: 回复 2# 的帖子

首先非常感谢丁老师的欣赏。
至于说切二张白片，一张烤二小时，一张烤过夜，我反复做了几例，结果显示，过夜的就是阴性，而烤二小时的全部都有阳性，并且阳性强度都还可以。因为都是拿以前的阳性片做对照。也许就这几例并不能说明什么，但我想最起码烤片的温度和时间是影响结果的其中因素之一吧。
接受丁老师的建议，继续做对照。。。

作者: dingwei 时间: 2011-8-23 19:48

烤片的温度和时间对免疫组化结果肯定有影响，但62度2小时与65度过夜不应该会这么明显。以前我这有进修生做过实验对照，70度过夜，影响也不是很明显。总觉得那里还有问题。

作者: 格言 时间: 2011-8-23 23:27

我到现在也一直似乎有些疑问，觉得烤片62度2小时跟65度过夜，区别真的有这么大吗？不过大部分抗体65过夜还是没有什么影响的，只是有些需要用EDTA修复的抗体就有影响了，如（CD10、CD15、CD30、CD35、WT1），这几个抗体（65度过夜）总是做不好，不是不表达就是表达的很弱。后来62度2小时做出来的结果就很满意。面对这种现象，我都不知道该怎么解释了。
请教丁老师。。。

作者: xkj2797xkj 时间: 2011-8-23 23:42

建议烤片时间和温度为：58-60°C度烤片2-3小时!

作者: xiaoniou777 时间: 2011-8-24 00:06 标题: 标题

我们一直是过夜烤片，效果还是挺好的呀，个人认为，跟烤片关系不是太大吧？

作者: flyaqmt 时间: 2011-8-24 08:28

我们也有两个病例做Ki67竟然是膜阳性，找了好长时间也没找到原因。要是我们的小姑娘如你这般，该多好啊

作者: dingwei 时间: 2011-8-24 09:26

引用:

原帖由格言于 2011-8-23 23:27 发表
我到现在也一直似乎有些疑问，觉得烤片62度2小时跟65度过夜，区别真的有这么大吗？不过大部分抗体65过夜还是没有什么影响的，只是有些需要用EDTA修复的抗体就有影响了，如（CD10、CD15、CD30、CD35、WT1），这几个抗 ...

非常好的经验，值得大家学习。像CD30，我们就发现用EDTA修复没有用柠檬酸高温修复的好，和你说的一样，表达很弱或有的细胞不表达；而柠檬酸高温修复表达就很好。这是否在65度与烤片过夜有关，看来要好好试一下。

作者: xiaomin 时间: 2011-8-24 17:54

非常感谢大家给的经验，学习了，加油

作者: 格言 时间: 2011-8-24 18:44

看来还得多做对照，继续关注中。。。
谢谢丁老师的点拨。

作者: histotechnology 时间: 2011-8-24 19:19 标题: 回复 1# 的帖子

考片温度当然对免疫组化结果有影响，建议不要高于60度

作者: hmy 时间: 2011-8-24 21:36

我们的免疫组化一直也是过夜在做的，好像也没得什么异常，我觉得是不是哪里还有问题呢？

作者: xkj2797xkj 时间: 2011-8-24 22:10

引用:

原帖由 hmy 于 2011-8-24 21:35 发表
我们的免疫组化一直也是过夜在做的，好像也没得什么异常，我觉得是不是哪里还有问题呢？

呵呵，说的是过夜烤片，做组化我也是过夜，很好的！

作者: xinfangjie315 时间: 2011-8-25 18:39

楼主钻研精神值得学习。
技术员的工作看似机械、简单，但是深究其中原理还是很深奥的，
多泡泡论坛，收益匪浅。

作者: 候鸟。 时间: 2011-8-29 16:42

各位老师们加油哦！

作者: 95051 时间: 2011-8-30 17:19

烤片62度2小时会容易脱片吗，我们有时也过夜，但碰到当天切并要结果的，我们总是要85度烤半小时以上，总觉得62度不够，带鼓风的烤箱吗？

作者: xkj2797xkj 时间: 2011-8-30 18:30

引用:

原帖由 95051 于 2011-8-30 17:19 发表
烤片62度2小时会容易脱片吗，我们有时也过夜，但碰到当天切并要结果的，我们总是要85度烤半小时以上，总觉得62度不够，带鼓风的烤箱吗？

不能那么高的温度的！

作者: 格言 时间: 2011-8-31 08:31 标题: 回复 18# 的帖子

我们用的是电热恒温鼓风干燥箱。

作者: JOJOwowo 时间: 2011-9-6 20:09

新手，得好好向大家学习

作者: JOJOwowo 时间: 2011-9-6 20:11

我们科一直用的是自动染片机，烤片也机器里运行，感觉免疫组化向来就做得不怎么样啊，我得回去好好研究下，谢谢各位

作者: dingwei 时间: 2011-9-6 20:52

自动染片机只是机器，帮你操作一下，要做得好，还得自己掌握稀释比。光即用型抗体是做不好的。

作者: 格言 时间: 2011-9-7 08:12

要掌握好稀释比，还得有个实验摸索和不断做对照的过程。请问丁老师，要想缩短这一周期，有什么捷径吗？

作者: huage5401 时间: 2011-9-7 16:11 标题: 学习

很好的经验，学习！

作者: 刹那公子 时间: 2011-9-9 07:46

60度一个小时就可以了。

作者: luo 时间: 2011-9-14 10:06

好同志啊

作者: 元始 时间: 2011-9-17 18:12

学习了，

作者: 526502802 时间: 2012-1-17 22:33

还好我们一直都是2.5到3个小时62度

作者: castle1979 时间: 2012-1-17 22:51

很奇怪上面各位同行为什么采取60度左右烤几个小时的
我做免疫组化，从来都是90-99度之间，具体温度没有测过烤半小时就做
烤片温度高对免疫组化的影响从何说起，理论上支持不了
像上面提到的60来度烤几个小时，一批片子都快做完了都。。。
另外罗氏VENTANA自动免疫组化机第一个步骤就是99度烤片10分钟

作者: junyi4444 时间: 2012-1-18 21:40

做组化我也是过夜，大概60度，因为医生开出来的很晚，切完就下班了

作者: junyi4444 时间: 2012-1-18 21:42

我们现在也用了罗氏的机子，比以前要做的好了

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