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标题: 大家帮忙看看 [打印本页]

作者: guting2006 时间: 2012-1-6 15:44 标题: 大家帮忙看看

这张HE切片有什么问题？谢谢

作者: luo 时间: 2012-1-6 16:50

切片质量还是镜下形态？

作者: Tony 时间: 2012-1-6 18:27

look likely a lymph folicular

作者: guting2006 时间: 2012-1-6 22:14

是切片质量，不好意思。是淋巴瘤的片子

作者: ChenRong 时间: 2012-1-8 22:41

切片质量？
你指的有深有浅？
还是中间那堆？
还是不红？
我怎么觉得蛮好

作者: guting2006 时间: 2012-1-9 17:08

程老师啊，您好！这个片子是这样的，镜下看：无细胞核结构，哪怕染一秒，也一样，延长染色时间，延长分化时间也一样。起初以为是细胞收缩导致的，后调整脱水时间如下：70酒精3h，85酒精2h，95酒精1h，95酒精1h，100酒精1h，100酒精1h，100酒精45min，二甲苯30，二甲苯30，二甲苯20min，石蜡I为15min，石蜡II，III，IV各30min，温度60.，切片的烤片温度65半小时。无改善，后怀疑固定有问题，遂标本切开固定12小时，也如此。LN及淋巴瘤对细胞核比较要求高，颈清LN有时好有时坏。现怀疑标本离体时间太长而未及时固定，不知到各位老师以为如何？敬请指教。

[ 本帖最后由 guting2006 于 2012-1-9 17:10 编辑 ]

作者: Tony 时间: 2012-1-9 22:07

personaly i feel if antigen preserved ,it is ok,lymphoma eventually need ihc diagnose

作者: ChenRong 时间: 2012-1-9 22:45

如果排除体外时间停留很长时间的话，那么你可以切的薄点，似乎是片子厚了，在我刚才点击图片放大观察后还是可以看到核里面的影子的。还有你的分化液盐酸酒精换新的，当盐酸酒精时间长了或是带入较多的水分大大降低分化效果，就算时间在长也是无用。不要怕过分化。

作者: shanghainese 时间: 2012-1-10 12:32

引用:

原帖由 guting2006 于 2012-1-9 17:08 发表
程老师啊，您好！这个片子是这样的，镜下看：无细胞核结构，哪怕染一秒，也一样，延长染色时间，延长分化时间也一样。起初以为是细胞收缩导致的，后调整脱水时间如下：70酒精3h，85酒精2h，95酒精1h，95酒精1h，100酒 ...

您用的是哪一种苏木素液？
2005年我回来的时候几经讲了这个问题，也许我没有讲得仔细，请原谅。

作者: shanghainese 时间: 2012-1-10 14:21

2005年我回来的时候已经讲了这个问题，也许我没有讲得仔细，请原谅。

作者: guting2006 时间: 2012-1-10 17:34

shanghainese老师，您好！

不好意思，那时候您讲的时候我肯定没有仔细听

。我们还是用的哈里氏。和这个有关？同一批标本有好有坏，主要是细胞核。冰冻和冰剩组织，冰冻组织一般较好，冰剩有时候好有时候不好。ＬＮ和淋巴瘤比较明显。本人知识浅薄，还望大家多多指教。谢谢

作者: guting2006 时间: 2012-1-10 17:37

引用:

原帖由 ChenRong 于 2012-1-9 22:45 发表
如果排除体外时间停留很长时间的话，那么你可以切的薄点，似乎是片子厚了，在我刚才点击图片放大观察后还是可以看到核里面的影子的。还有你的分化液盐酸酒精换新的，当盐酸酒精时间长了或是带入较多的水分大大降低分 ...

啊！陈老师，您看到了？我们好几个人都没看见

，它另外一块做过冰冻的片子细胞核倒是很清楚。我照您的办法试过了，同样的蜡块，切1和２微米各一张，新配分化液，还是没有改善，不知道是技术不到家还是什么？

[ 本帖最后由 guting2006 于 2012-1-10 17:43 编辑 ]

作者: ChenRong 时间: 2012-1-10 19:14

引用:

原帖由 guting2006 于 2012-1-10 17:37 发表

啊！陈老师，您看到了？我们好几个人都没看见，它另外一块做过冰冻的片子细胞核倒是很清楚。我照您的办法试过了，同样的蜡块，切1和２微米各一张，新配分化液，还是没有改善，不知道是技术不到家还是什么？

这样看来，还是组织的固定关系了，通常情况下，冰冻取好后剩下的组织不直接固定的，需要等冰冻报告发出无误不需要重取材了在固定，（我科直接固定掉的

），如果是不直接固定掉的话这段时间冰剩的组织细胞就要自溶了，特别是细胞核里面的宝贝。

作者: guting2006 时间: 2012-1-10 21:30

引用:

原帖由 ChenRong 于 2012-1-10 19:14 发表

这样看来，还是组织的固定关系了，通常情况下，冰冻取好后剩下的组织不直接固定的，需要等冰冻报告发出无误不需要重取材了在固定，（我科直接固定掉的），如果是不直接固定掉的话这段时间冰剩的组织细胞就要自溶 ...

嗯，现在就怀疑呢。不过我们科也是直接固定的啊

，所以又好像不是固定的问题。我想请教一下陈老师您，做过冰冻的组织从冻头上直接卸下固定，会不会细胞自溶的慢了？而组织离体时间长的话，冰剩组织直接固定的同时细胞内部也在自溶，所以冰冻组织反而细胞核比冰剩组织清楚，会不会有这种可能？谢谢

作者: 逆风飞扬 时间: 2012-1-11 09:47

从技术角度说首先标本脱水过了，其次蜡块冷冻过了，切时哈哈气，淋巴的组织要切薄<3微米为佳

作者: shanghainese 时间: 2012-1-11 11:54

引用:

原帖由 guting2006 于 2012-1-10 17:34 发表
shanghainese老师，您好！不好意思，那时候您讲的时候我肯定没有仔细听。我们还是用的哈里氏。和这个有关？同一批标本有好有坏，主要是细胞核。冰冻和冰剩组织，冰冻组织一般较好，冰剩有时候好有时候不好。 ...

Harris 苏木素液染色性很强,适用于脱钙的组织, 但是对淋巴组织, 淋巴瘤会染色过深。你可以选择Mayer's 或 Gill's 苏木素液。

冰冻组织一般较好，冰剩有时候好有时候不好，是因为解冻没有解好产生了冰结晶。

作者: ChenRong 时间: 2012-1-11 17:49

冰剩-----我们这指的是不做冰冻的剩下的组织，这是老的叫法传下来的，可能各地理解的不同。
不做冰冻的那些组织在去掉做冰冻的组织后，直接固定实肯定没有做冰冻的组织薄，还很有可能很厚的一个肿瘤，里面实际固定可能会不够
（如果楼主说你们都是切成2-3MM薄片组织后在固定的，那我就无解了）

作者: guting2006 时间: 2012-1-11 20:29

陈老师，我们没有切的这么薄，大概1cm。因为很多情况下，LN都不厚啊，切开后应该不存在固定不充分的情况。

作者: guting2006 时间: 2012-1-11 20:30

引用:

原帖由 逆风飞扬 于 2012-1-11 09:47 发表
从技术角度说首先标本脱水过了，其次蜡块冷冻过了，切时哈哈气，淋巴的组织要切薄

请教这位老师，您觉的哪里脱水过了？我的脱水步骤在前面写了，谢谢

作者: guting2006 时间: 2012-1-11 20:33

引用:

原帖由 shanghainese 于 2012-1-11 11:54 发表

Harris 苏木素液染色性很强,适用于脱钙的组织, 但是对淋巴组织, 淋巴瘤会染色过深。你可以选择Mayer's 或 Gill's 苏木素液。

冰冻组织一般较好，冰剩有时候好有时候不好，是因为解冻没有解好产生了冰结晶。

谢谢，shanghainese 老师。我得配个试试。冰剩没有冻过，也会有结晶？那怎么解冻不会产生冰结晶呢？

[ 本帖最后由 guting2006 于 2012-1-11 20:38 编辑 ]

作者: shanghainese 时间: 2012-1-11 22:40

引用:

原帖由 guting2006 于 2012-1-11 20:33 发表

谢谢，shanghainese 老师。我得配个试试。冰剩没有冻过，也会有结晶？那怎么解冻不会产生冰结晶呢？

是在化冻的时候产生的。医院图书馆里有一本书叫组织化学,里面有一节专门讲冰冻，有时间可以看一看。

作者: shanghainese 时间: 2012-1-11 23:05

按照我们的传统，冰剩组织做石蜡切片，只作为参考。因为历来冰剩组织做石蜡切片的组织形态都很差。要解决这个问题不是不可以，只是要花代价。问题是值不值得做。

作者: guting2006 时间: 2012-1-12 16:58

shanghainese老师，您好啊！您有可能前面没有看清楚，我说的“冰剩”是没有做过冰冻的组织。

作者: shanghainese 时间: 2012-1-12 23:25

引用:

原帖由 guting2006 于 2012-1-12 16:58 发表
shanghainese老师，您好啊！您有可能前面没有看清楚，我说的“冰剩”是没有做过冰冻的组织。

送检冰冻组织在冰冻取材之后剩余组织访在福尔马林里固定。以前一直没有都没有问题。

作者: shanghainese 时间: 2012-1-13 11:46

更正: 送检冰冻组织在冰冻取材之后剩余组织访在福尔马林里固定。以前一直都没有问题。

作者: 王花咪 时间: 2012-3-21 22:04

您低浓度酒精脱水时间要3小时？是否太长？低浓度酒精对细胞冲击力很大的，浸泡时间太长可能会引起细胞肿胀导致细胞形态破坏。染色时分化很重要，另外最好用透明剂湿封片。切片时尽量切薄一些，单看机器调没用，还要凭肉眼判断是否切得过厚。

作者: dingwei 时间: 2012-3-22 15:34

引用:

原帖由 王花咪 于 2012-3-21 22:04 发表
您低浓度酒精脱水时间要3小时？是否太长？低浓度酒精对细胞冲击力很大的，浸泡时间太长可能会引起细胞肿胀导致细胞形态破坏。染色时分化很重要，另外最好用透明剂湿封片。切片时尽量切薄一些，单看机器调没用，还要凭 ...

这个说法是错误的。如果固定好的标本，低浓度酒精时间长，对组织的处理和形态都好。当然浸泡过长：如几个月或几年，那另当别论。

作者: guting2006 时间: 2012-3-23 15:02

引用:

原帖由 dingwei 于 2012-3-22 15:34 发表
这个说法是错误的。如果固定好的标本，低浓度酒精时间长，对组织的处理和形态都好。当然浸泡过长：如几个月或几年，那另当别论。

那如果固定不好的标本，低浓度酒精时间长的话，会产生什么影响吗？谢谢丁老师

作者: bkhmcj 时间: 2012-8-17 16:41

我们以前LN也出现过这样的问题，后来不断改进，现在略微有改变
1、LN剖开固定过夜；2、第二缸脱水换成酒精福尔马林溶液；3、切片2MM够了，捞片多捞几张，便于做比较。苏木素深染，分化要足够。
经验之谈，希望能帮到你。

作者: ziyimama 时间: 2012-9-29 22:04

淋巴结和淋巴瘤的，你试试用抗原修复后再染HE。

作者: willfirm 时间: 2012-10-1 16:56 标题: 感觉是片子切得稍微有点厚

作者: 北京王府医院 时间: 2012-11-30 16:26 标题: 回复 6# 的帖子

应提高烤片温度75度20分钟，二甲苯脱蜡时间长一些，盐酸乙醇分化时间加长，我的意见请参考电话13661298949

作者: ChenRong 时间: 2012-12-18 09:30

不知道楼主有没有找到合适的问题

作者: fangqingquan 时间: 2012-12-24 21:58

引用:

原帖由 guting2006 于 2012-1-9 17:08 发表
程老师啊，您好！这个片子是这样的，镜下看：无细胞核结构，哪怕染一秒，也一样，延长染色时间，延长分化时间也一样。起初以为是细胞收缩导致的，后调整脱水时间如下：70酒精3h，85酒精2h，95酒精1h，95酒精1h，100酒 ...

作者: fangqingquan 时间: 2012-12-24 22:02 标题: 回复 6# 的帖子

你的浸蜡时间“石蜡I为15min，石蜡II，III，IV各30min”，我觉得浸蜡不够。我们的浸蜡四缸，时间共为3~4小时。

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