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标题: 改良Ehrlich 苏木精染液在HE 染色中的应用 [打印本页]

作者: 九日 时间: 2012-2-10 17:03 标题: 改良Ehrlich 苏木精染液在HE 染色中的应用

在临床与实验病理研究中，常用HE 染色方法观察正常
和病变组织的形态结构。它具有染色迅速、色彩鲜艳、结果
稳定、容易掌握等优点，不足之处在于配制过程中苏木精氧
化程度不易控制，使用过程中氧化颗粒不易去除，分化过程
中分化时间不易掌握等［1，2
］。这些因素直接影响了苏木精
染液的使用寿命和染色效果，因此在配制和使用过程如何控
制苏木精氧化至关重要。我们在工作实践中摸索出一种改
进的苏木精染液配制方法，不仅解决了苏木精氧化过快的问
题，而且还免除了分化步骤，延长了苏木精染液的使用寿命。
现将该方法具体介绍如下。
1 材料与方法
1． 1 材料本院手术切除的肿瘤组织，苏木精、无水乙醇、
硫酸铝钾、柠檬酸、甘油、蒸馏水、无色小口瓶等。
1． 2 方法
1． 2． 1 改良Ehrlich 苏木精染液的配制取20 g 硫酸铝钾
充分碾碎，放入100 ml 蒸馏水中加热至60 ℃完全溶解，倒
入500 ml 的无色小口瓶中，再加入甘油120 ml。取4 g 苏木
精溶于180 ml 无水乙醇中，待苏木精完全溶解后倒入盛有
硫酸铝钾溶液的500 ml 无色小口瓶中，再加入柠檬酸1 g，
并充分摇匀，塞好瓶塞，置阳光充足的地方使其自然成熟，成
熟时间约2 个月。
1． 2． 2 分步对比染色肿瘤组织经固定、取材后，直接入脱
水机进行常规脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、脱蜡、水化后，一
部分行改良Ehrlich 苏木精染液染色，另一部分行Ehrlich 苏
木精染液染色，经伊红复染后中性树胶封固，镜检。
2 结果
用Ehrlich 苏木精染液对组织切片染色需5 ～ 20 min，改
良Ehrlich 苏木精染液组织切片染色时间仅需3 ～ 5 min。冷
冻组织切片和细胞涂片染色需1 min 左右，且苏木精对细胞
核的选择性着色能力显著强于常规苏木精染液。切片经苏
木精染色后，无须分化，蓝化后直接行伊红复染即可。用改
良Ehrlich 苏木精染液制成的HE 切片，胞核着色呈深蓝色，
胞质呈红色或淡红色，核质清晰，对比鲜明，其染色效果优于
Ehrlich 苏木精染液( 图1、2) 。每配制400 ml 改良苏木精染
液可染切片近5 000 张，使用期限约6 个月，且无氧化膜以
及极少量苏木精沉渣形成。

3 讨论
苏木精是目前公认的最好的常规细胞核染色剂之一。
苏木精分子本身染色作用很弱，甚至不能染色，苏木精分子
只有被氧化成苏木红后，具备了发色团和助色团，才具有良
好的染色性能［3］。苏木精分子的氧化有人工和天然两种方
法，人工氧化在较短时间内可将苏木精全部变成苏木红，新
配制的苏木精染液可立即使用，但在配制和使用过程中如果
苏木精分子氧化过度则可破坏该分子的结构，从而影响染色
效果。人工氧化的关键问题是氧化的度较难掌握。天然氧
化法需要较长时间，氧化过程缓和，苏木精在短期内不会全
部变成苏木红，在预期期限内不会出现过氧化现象。
云南的平均海拔在2 000 m 左右，日照充足，气候温和，
很适合苏木精分子的天然氧化。改良Ehrlich 苏木精染液配
制后，白天置于阳光下，晚上置于37 ℃的温箱里，夏季50 天
或冬季60 天左右即可使用。改良Ehrlich 苏木精染液中苏
木精的含量比原配方略有增加，未氧化的苏木精在使用过程
中逐渐氧化成苏木红，不断补充染色过程中所消耗的苏木
红，从而保持了染液的稳定性和较持久的染色能力。改良苏
木精染液中用柠檬酸取代原配方中的冰醋酸作促染剂，避免
了冰醋酸在使用过程中易挥发、性质不稳定等弱点，使染液
的染色能力始终保持较佳状态，并显著降低细胞质的着色而
特异性地着染细胞核。细胞核的着色取决于染色和分化时
间，因此就省去了盐酸分化这一步骤，缩短了染色时间，减少
了质控环节，提高了制片质量。改良苏木精染液中加入了比
原配方稍多的甘油，不仅增加了染液的稳定性，还能抵抗苏
木精分子的过度氧化，减少染液表面及容器壁上氧化膜的形
成，增加了染液的渗透能力，使切片着色均匀、细致。这样制
出的HE 切片由于省去了盐酸分化步骤，使切片的存档保质
能力大大提高，避免了因HE 切片存档过久，使细胞核失色
的问题。
苏木精染液在使用过程中都存在染色力下降的问题，这
除了上述谈及的染液中苏木红含量减少外，还与染液的pH
值变化有关。切片进入苏木精染液前必须经过脱蜡、水化等
处理，不可避免地带入一些自来水，使染液的pH 值逐渐升
高，高pH 值的染液不仅使苏木精氧化过快，还能降低苏木
红与细胞核的结合力; 当切片离开苏木精染液时还会带走一
部分苏木精染液，进一步影响染液的染色能力，致使苏木精
染液使用一段时间后就会逐渐失效。本研究在改良的苏木
精染液中加入过量的苏木精和硫酸铝钾，一方面保证媒染剂
硫酸铝钾中的铝离子与足够的苏木红结合形成色淀，充分与
组织结合; 另一方面，饱和的硫酸铝钾溶液呈弱酸性，可稳定
苏木精染液的pH 值，使其保持在较低的水平。我们在使用
中还发现，当染液中的硫酸铝钾减少时，再向其中加入适量
的硫酸铝钾，始终使染液中的硫酸铝钾保持饱和状态，对维
持良好的染色效果很有必要。有的学者在切片进入苏木精
染液前先经1% ～ 2% 醋酸溶液酸化处理，也取得了较好的
染色效果［4］。
参考文献:
［1］陈彦杰．盐酸分化液颜色—直观判定苏木精染液盐酸分化液
时效性的客观指标［J］．现代中西医结合杂志，2010，19( 7) :
849 － 50．
［2］李志娟，王欣．延长Harris 苏木素染液使用寿命的研究
［J］．淮海医药，2
007，( 25) : 247 － 9．
［3］马奎，马恒辉，石群立，等．病理制片质量控制［J］．临床
与实验病理学杂志，2
001，1
7( 5) : 439 － 40．
［4］陈彦杰． Harris 苏木素染液配制过氧化和使用防氧化控制的
探讨［J］．中国当代医药，2
010，1
7( 23) : 46 － 147．

此文转载于《临床与实验病理学杂志》2011 Aug; 27( 8)
作者：王力，杨举伦，赵稳兴，蔡琳，李涛
作者单位：作者单位: 成都军区昆明总医院病理科，昆明650032

作者: 九日 时间: 2012-2-10 17:20

说明：原文中的图不能转载，因而空缺

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