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标题: 改良Ehrlich 苏木精染液在HE 染色中的应用 [打印本页]

作者: 九日    时间: 2012-2-10 17:03     标题: 改良Ehrlich 苏木精染液在HE 染色中的应用

在临床与实验病理研究中,常用HE 染色方法观察正常
和病变组织的形态结构。它具有染色迅速、色彩鲜艳、结果
稳定、容易掌握等优点,不足之处在于配制过程中苏木精氧
化程度不易控制,使用过程中氧化颗粒不易去除,分化过程
中分化时间不易掌握等[1,2
]。这些因素直接影响了苏木精
染液的使用寿命和染色效果,因此在配制和使用过程如何控
制苏木精氧化至关重要。我们在工作实践中摸索出一种改
进的苏木精染液配制方法,不仅解决了苏木精氧化过快的问
题,而且还免除了分化步骤,延长了苏木精染液的使用寿命。
现将该方法具体介绍如下。
1 材料与方法
1. 1 材料本院手术切除的肿瘤组织,苏木精、无水乙醇、
硫酸铝钾、柠檬酸、甘油、蒸馏水、无色小口瓶等。
1. 2 方法
1. 2. 1 改良Ehrlich 苏木精染液的配制取20 g 硫酸铝钾
充分碾碎,放入100 ml 蒸馏水中加热至60 ℃完全溶解,倒
入500 ml 的无色小口瓶中,再加入甘油120 ml。取4 g 苏木
精溶于180 ml 无水乙醇中,待苏木精完全溶解后倒入盛有
硫酸铝钾溶液的500 ml 无色小口瓶中,再加入柠檬酸1 g,
并充分摇匀,塞好瓶塞,置阳光充足的地方使其自然成熟,成
熟时间约2 个月。
1. 2. 2 分步对比染色肿瘤组织经固定、取材后,直接入脱
水机进行常规脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、脱蜡、水化后,一
部分行改良Ehrlich 苏木精染液染色,另一部分行Ehrlich 苏
木精染液染色,经伊红复染后中性树胶封固,镜检。
2 结果
用Ehrlich 苏木精染液对组织切片染色需5 ~ 20 min,改
良Ehrlich 苏木精染液组织切片染色时间仅需3 ~ 5 min。冷
冻组织切片和细胞涂片染色需1 min 左右,且苏木精对细胞
核的选择性着色能力显著强于常规苏木精染液。切片经苏
木精染色后,无须分化,蓝化后直接行伊红复染即可。用改

良Ehrlich 苏木精染液制成的HE 切片,胞核着色呈深蓝色,
胞质呈红色或淡红色,核质清晰,对比鲜明,其染色效果优于
Ehrlich 苏木精染液( 图1、2) 。每配制400 ml 改良苏木精染
液可染切片近5 000 张,使用期限约6 个月,且无氧化膜以
及极少量苏木精沉渣形成。

3 讨论
苏木精是目前公认的最好的常规细胞核染色剂之一。
苏木精分子本身染色作用很弱,甚至不能染色,苏木精分子
只有被氧化成苏木红后,具备了发色团和助色团,才具有良
好的染色性能[3]。苏木精分子的氧化有人工和天然两种方
法,人工氧化在较短时间内可将苏木精全部变成苏木红,新
配制的苏木精染液可立即使用,但在配制和使用过程中如果
苏木精分子氧化过度则可破坏该分子的结构,从而影响染色
效果。人工氧化的关键问题是氧化的度较难掌握。天然氧
化法需要较长时间,氧化过程缓和,苏木精在短期内不会全
部变成苏木红,在预期期限内不会出现过氧化现象。
云南的平均海拔在2 000 m 左右,日照充足,气候温和,
很适合苏木精分子的天然氧化。改良Ehrlich 苏木精染液配
制后,白天置于阳光下,晚上置于37 ℃的温箱里,夏季50 天
或冬季60 天左右即可使用。改良Ehrlich 苏木精染液中苏
木精的含量比原配方略有增加,未氧化的苏木精在使用过程
中逐渐氧化成苏木红,不断补充染色过程中所消耗的苏木
红,从而保持了染液的稳定性和较持久的染色能力。改良苏
木精染液中用柠檬酸取代原配方中的冰醋酸作促染剂,避免
了冰醋酸在使用过程中易挥发、性质不稳定等弱点,使染液
的染色能力始终保持较佳状态,并显著降低细胞质的着色而
特异性地着染细胞核。细胞核的着色取决于染色和分化时
间,因此就省去了盐酸分化这一步骤,缩短了染色时间,减少

了质控环节,提高了制片质量。改良苏木精染液中加入了比
原配方稍多的甘油,不仅增加了染液的稳定性,还能抵抗苏
木精分子的过度氧化,减少染液表面及容器壁上氧化膜的形
成,增加了染液的渗透能力,使切片着色均匀、细致。这样制
出的HE 切片由于省去了盐酸分化步骤,使切片的存档保质
能力大大提高,避免了因HE 切片存档过久,使细胞核失色
的问题。
苏木精染液在使用过程中都存在染色力下降的问题,这
除了上述谈及的染液中苏木红含量减少外,还与染液的pH
值变化有关。切片进入苏木精染液前必须经过脱蜡、水化等
处理,不可避免地带入一些自来水,使染液的pH 值逐渐升
高,高pH 值的染液不仅使苏木精氧化过快,还能降低苏木
红与细胞核的结合力; 当切片离开苏木精染液时还会带走一
部分苏木精染液,进一步影响染液的染色能力,致使苏木精
染液使用一段时间后就会逐渐失效。本研究在改良的苏木
精染液中加入过量的苏木精和硫酸铝钾,一方面保证媒染剂
硫酸铝钾中的铝离子与足够的苏木红结合形成色淀,充分与
组织结合; 另一方面,饱和的硫酸铝钾溶液呈弱酸性,可稳定

苏木精染液的pH 值,使其保持在较低的水平。我们在使用
中还发现,当染液中的硫酸铝钾减少时,再向其中加入适量
的硫酸铝钾,始终使染液中的硫酸铝钾保持饱和状态,对维
持良好的染色效果很有必要。有的学者在切片进入苏木精
染液前先经1% ~ 2% 醋酸溶液酸化处理,也取得了较好的
染色效果[4]。
参考文献:
[1] 陈彦杰. 盐酸分化液颜色—直观判定苏木精染液盐酸分化液
时效性的客观指标[J]. 现代中西医结合杂志,2010,19( 7) :
849 - 50.
[2] 李志娟,王欣. 延长Harris 苏木素染液使用寿命的研究
[J]. 淮海医药,2
007,( 25) : 247 - 9.
[3] 马奎,马恒辉,石群立,等. 病理制片质量控制[J]. 临床
与实验病理学杂志,2
001,1
7( 5) : 439 - 40.
[4] 陈彦杰. Harris 苏木素染液配制过氧化和使用防氧化控制的
探讨[J]. 中国当代医药,2
010,1
7( 23) : 46 - 147.


此文转载于《临床与实验病理学杂志》2011 Aug; 27( 8)
作者:王力,杨举伦,赵稳兴,蔡琳,李涛
作者单位:作者单位: 成都军区昆明总医院病理科,昆明650032
作者: 九日    时间: 2012-2-10 17:20

说明:原文中的图不能转载,因而空缺




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