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标题: 固定液 [打印本页]
作者: 123    时间: 2004-5-7 18:49     标题: 固定液

请问哪种固定液最好？而哪种又是最常用的？并请教配方。
作者: fw1418    时间: 2004-5-8 17:47     标题: 固定液

10%中性福尔马林固定液1000ml
Na2HPO4·12H2O 16.3g
NaH2PO4·2H2O4.5g
福尔马林100ml
作者: 法医    时间: 2004-5-21 20:51     标题: 固定液

当然可以。用比较稀一些的染色液染色时间长一些效果要好于浓染色液短时间染色。
作者: ylzhao    时间: 2004-9-30 21:52     标题: 固定液

如果你用harri's苏木精可以不稀释，只要用盐酸酒精多分化几秒或10几秒就可以。免得麻烦。
作者: ylzhao    时间: 2004-10-1 00:46     标题: 固定液

123老师你所说的问题，就应用范围来说10%福尔马林应用范围较广，是一种较常用的固定剂。不同的研究目的选用不同的固定剂。实际上没最好的固定剂。不同固定液的配方适合于不同研究。
10%中性缓冲福尔马林
用途：10%中性缓冲福尔马林是一种良好的常规固定剂。此液是在低渗缓冲离子中pH6.8
试剂：
磷酸二氢钠（monohydrate）4.0g
磷酸氢二钠 (anhydrous)     6.5g
甲醛 37%                   100.0ml
蒸馏水                                  900.0ml
固定时间：标本固定1～4小时/mm，大标本应延长固定时间。
步骤：
1．多数外科病理标本都能接受甲醛固定。
2．组织脱水机前两个位置最好使用中性福尔马林固定液。
3．标本可以无限期的保持在10%福尔马林中或转移到70%乙醇中。
ZENKER’S液
用途：Zenker’s 液是一种核固定剂。该液是细胞学及病理学常用的固定剂，对细胞核固定最好，最适合于造血和网状内皮组织的固定。也常作为三色染色的组织固定剂，在三色染色中还作为媒染剂使用。但对于含血量较多的组织标本尽量不要选Zenker’s 液固定。
试剂：
Zenker’s  贮备液：
氯化汞 50.0g
重络酸钾25.0g
硫酸钠10.0g
蒸馏水 1000.0ml
充分混合，稳定性2年。
Zenker’s 工作液：
Zenker’s  贮备液           95.0ml
冰醋酸 5.0ml
用前混合，固定时间：12-36小时。
步骤：
1．由于Zenker’s 液中含氯化汞，固定后必须脱去汞色素。
2．组织必须用流水冲洗去除重络酸钾否则乙醇脱水会引起络色素。
B-5固定液
用途：B-5固定液是骨髓活检常规固定液，并且在怀疑淋巴瘤时固定淋巴结。
试剂：
B-5贮备液：
氯化汞12.0g
醋酸钠            2.5g
蒸馏水         200.0ml
充分混合，不使用任何金属用具或金属类盖子，
贮备液自配制之日起稳定性1年。
工作液：
贮备液20.0ml
甲醛 2.0ml
使用前立即混合。处理：把使用过的B-5固定液倒进玻璃瓶中标明“B-5废液”不要倒入下水管道。
固定时间：2～4小时，在容器上注明时间，不要遗忘过夜。
步骤：
1．经过固定的标本保留在10%福尔马林或70%乙醇中。
2．B-5液固定的组织切片含有汞沉淀在染色前必须进行脱色素处理（ 脱蜡后：① Lugol’s碘：5min,水洗。②5%硫代硫酸钠：5min ，水洗并按照染色步骤要求进行染色）。
BOUIN’S固定液
用途：是一种良好的外科活检标本常规固定液。也常作为媒染剂使用。对脂肪组织的固定效果较好，适用于含脂肪较多的组织标本的固定。如含脂肪较多的淋巴结、脂肪瘤、乳腺组织等。
试剂：
Bouin’s 固定液:
饱和苦味酸           3000.0ml
甲醛1000.0ml
冰醋酸 200.0ml
固定时间：小块活检组织固定2～4小时，大标本可固定3天。
步骤：
1．经过固定的组织可保持在10%福尔马林或70%乙醇中。
2．染色前脱掉组织中的苦味酸 ①自来水冲洗 ②50%乙醇 ③或70%乙醇饱和碳酸锂
乙醇BOUIN’S液（DUBOSCQ-BRAZIL FLUID）
用途：用于固定肾活检，组织学制备固定液。
试剂：
乙醇Bouin’s贮存液:
80%乙醇          750.0ml
甲醛300.0ml
苦味酸              5.0g
充分混合，液体稳定性2年，标明配制日期。
工作液：
贮存液          70.0ml14.0ml
醋酸5.0ml10.0ml
使用前加醋酸。
固定时间：1～4小时。
步骤：
1．把新鲜组织标本放进乙醇Bouin’s 工作液中。
2．充分固定后把组织移到70%的乙醇中。
HOLLANDE’S固定液
用途：作为胃肠和前列腺活检基本固定剂，这种固定剂让H.E染色更清晰，它“软化”组织避免切片脆裂。苦味酸会溶解掉红细胞。
Lillie认为该液是一种很好的骨髓活检标本固定剂，固定液中的醋酸可以脱钙。
试剂：
乙酸铜 75.0g
蒸馏水         3000.0ml
苦味酸           120.0g
甲醛300.0ml
冰醋酸 45.0ml
不要加热用蒸馏水溶解乙酸铜，慢慢加入苦味酸，搅拌至溶解。加入甲醛和醋酸。标明配制日期。
固定时间：小标本2～4小时，大标本4天。
步骤：
1．活检标本要立即放入Hollande’s固定剂中，标本容器上注明时间。
2．标本完成固定后保持在70%乙醇中。
3．不能让Hollande’s液固定的标本与磷酸缓冲福尔马林接触，否则会出现蓝色沉淀。
ORTH’S液
用途：用于证实肾上腺胞浆中嗜络微粒，这种证明可能对嗜络细胞瘤的诊断很重要。不是一种好的多用途的固定剂。
原理：嗜络微粒被络染成橙色到棕色，pH 5～6反应最强烈。
试剂：
Orth’s贮存液:
重络酸钾25.0g
硫酸钠10.0g
蒸馏水        1000.0ml
充分混合，标明日期。
Orth’s工作液:
Orth’s贮存液50.0ml
使用前加37%甲醛5.0ml
固定时间：固定24小时。
1．标本固定后一定用水洗。
2．然后再将标本放在70%乙醇中。
4%多聚甲醛固定液：
用途：进行免疫组织化学方法研究时常选用该固定液。动物灌注固定及后固定（动物器官经该液灌注后，然后取材，再用该液浸泡2-24小时）也常选该固定液固定。
试剂：
多聚甲醛                40g
PBS0.1 mol/L PH 7.4        500 ml  
混合后加热至60℃，搅拌并滴加1N NaOH 至清亮为止，冷却后加PBS 至总量1000 ml。
注固定时间24小时。
作者: ylzhao    时间: 2004-10-24 16:17     标题: 固定液

根据研究的需要选择固定剂，根据组织大小确定固定时间。常规H.E染色以10%福尔马林作为常规固定剂，固定梢长一点没有大的防碍。如果做免疫组化染色固定时间不宜太长，甲醛固定会造成部分组织抗原活性受到遮蔽。酶消化或抗原修复可以帮助暴露抗原。长时间甲醛固定会使多数抗原的活性丢失。甲醛作为基础固定剂对于细包浆抗原和膜结合免疫球蛋白固定是稳定的；福尔马林丙酮混合剂应用于淋巴细胞标记物的固定。通常10X10X3mm大小的组织，用10%缓冲福尔马林中固定6-24小时不会有影响。缓冲福尔马林固定组织的速度大约1～4小时/mm。许多资料推荐，组织块大小为10X10X3mm左右，组织的厚度一般不要超过5mm。比较大标本应该延长固定时间。固定后及时进行组织脱水处理，如果不能及进行组织脱水处理。固定完成后可以将组织转移到70%乙醇中适当延缓处理。组织转移到70%乙醇中可以解除甲醛对组织继续固定。组织脱水通常从70%乙醇开始。组织在低浓度70%乙醇中2-3天不会影响制片和染色。
细胞涂片
细胞涂片95%酒精固定或用含有聚乙二醇的酒精液喷雾固定。酒精对多数抗原活性的保存是满意的，尤其鉴别淋巴瘤和癌的区别。酒精固定对多数淋巴瘤标记物染色有影响。例如，T和B细胞抗原。所以，一般制作两种涂片，一种用于湿固定另一种涂片是通过空气干燥涂片，分别用于免疫组化染色。值得注意的是空气干燥涂片免疫染色常常表达较弱。通过延长抗体或抗原体浮育时间或使用敏感的抗体及多步骤免疫细胞化学技术得到补偿。本人直接经验有限不妥之处请多多指教。
作者: 轻羽飞扬    时间: 2004-10-31 17:23     标题: 固定液

苏木素染色过深可以进行分化,流水冲洗半小时或酸酒精中冲洗,随时观察效果,到达染色效果停止分化.



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