标题: 求助-血管的Verhoeff Van-Gieson弹力蛋白染色红色染不上为什么 [打印本页]

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作者: kyonana    时间: 2012-4-4 23:21     标题: 求助-血管的Verhoeff Van-Gieson弹力蛋白染色红色染不上为什么

各位前辈高人，不知道有没有高人对组织染色比较有经验的。
我做一个脑动脉瘤动物模型，然后动脉瘤局部的脑动脉管壁想染一下弹力蛋白，用的是Verhoeff Van-Gieson方法。由于买sigma的试剂实在太慢，于是就自己买了原料按照protocol自己配液染的。结果verhoeff法染IEL的弹力蛋白还可以，呈黑色。但是van-gieson本来染完，应该看到有呈红色的胶原蛋白，但是我染出来除了黑色就全是黄色了。不知道为什么。下图染的是正常的脑动脉血管。想请教一下这个染色不好可能是因为什么问题？或者有没有染弹力蛋白的经验，别的染色方法也行。
非常感谢！！！[attach]6889[/attach]
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用的protocol大致是：

溶液：

1）5%酒精苏木素染液：

5克苏木素溶解于100ml100%酒精中，可轻微加热助溶，过滤后保存备用。

2）10%三氯化铁溶液：

10克三氯化铁溶于100ml水中，即配即用。

3）Weigert’s 碘溶液：

取2克碘化钾溶解于少量水中，待其溶解完毕后于上述溶液中加入1克碘，待碘溶解后，立即加水稀释溶液，定容至100ml。溶液棕色瓶中避光室温保存。

4）Verhoeff’s工作液：

分别取20ml 5%酒精苏木素溶液，8ml 10%三氯化铁溶液，8ml Weigert’s 碘溶液；混合均匀别用（此溶液现配现用，用后即丢弃）。

5）2% 三氯化铁溶液：

由10%三氯化铁溶液稀释（现用现配）。

6）5%硫代硫酸钠水溶液。

7）VG染色液：

1ml 1%酸性品红，加饱和苦味酸45ml。

染色过程：

1、石蜡切片脱蜡至水；

2、切片入Verhoeff’s工作液1小时，至切片全部染成黑色后蒸馏水漂洗3次。

3、切片入2%三氯化铁分色1至2分钟；

4、分色完毕后切片入流水冲洗，光镜下观察：此时弹性纤维被染色黑色；背景为灰色；

5、流水冲洗后切片入5%硫代硫酸钠溶液1分钟；流水冲洗5分钟；

6、切片入VG染色液复染3至5分钟；

7、梯度酒精快速脱水（95%酒精一次，100%酒精两次）；二甲苯透明；封片。

8、染色完成后弹性纤维呈黑色或蓝黑色，细胞核呈黑色或蓝黑色；胶原纤维呈红色；肌纤维呈黄色

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作者: 悠悠我心    时间: 2012-11-1 18:54

我做过EVG法，贝索公司买的试剂盒，就是维多利亚蓝染弹力纤维，呈深蓝色，再套染VG，结果不错。

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