标题:
塑料不脱钙、石蜡包埋、明胶浸泡法对骨组织切片的比较
[打印本页]
作者:
九日
时间:
2012-4-20 08:56
标题:
塑料不脱钙、石蜡包埋、明胶浸泡法对骨组织切片的比较
骨组织内含有大量的钙盐和无机盐，如不脱钙切片，常给骨组织切片和染色造成非常大的困难，直接影响实验结果。作者根据研究的需要，对塑料包埋不脱钙、石蜡包埋、明胶浸泡3种方法切片及染色进行比较，以便找出一种最佳切片方法。
1 材料与方法
1.1
塑料包埋组 所用材料是我所研究生课题实验材料。新西兰大耳白兔10只，体重2.2～2.5 kg，♀、♂不限。取双侧尺桡骨1.5 cm保留周围少量肌肉。10％中性福尔马林固定。梯度乙醇脱水。甲液：甲基丙稀酸甲酯（MMA）75 ml，邻苯二甲酸二丁酯（DBP）25 ml。乙液：MMA 75 ml, DBP 25 ml过氧化苯甲酰1 g。丙液：MMA 75 ml，DBP 25 ml，过氧化苯甲酰2.5 g。将上述三液搅拌数小时，组织浸入甲、乙、丙各48 h。再用新配的丙液包埋于小瓶内40℃过夜。第二天加满包埋剂，盖瓶塞，置于38℃～40℃水浴中聚合2～3天。用专切不脱钙的D刀切片厚5 μm。1％火棉胶封片，80％乙醇硬化，水洗后染色。
1.2
石蜡组 取新西兰大耳白兔双尺桡骨10只。体重2.2～2.5 kg，♀、♂不限。保留周围少量肌肉，10％中性福尔马林固定。用下液脱钙：生理盐水900 ml，甲醛100 ml，甲酸70 ml，盐酸80 ml，结晶氧化铝60 g，冰醋酸25 ml。脱钙至终点，流水冲洗24 h。梯度乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，切片厚4 μm，常规脱蜡，梯度乙醇脱水，1％火棉胶封片，80％乙醇硬化，水洗后染色。
1.3 明胶浸泡组
取狗的腰椎修成4 cm的完整脊柱骨10个，10％中性福尔马林固定，甲酸-盐酸混合脱钙液脱钙至终点。流水冲洗24 h，入10％明胶液浸泡3～5天，换入20％明胶液内浸泡5～7天。OCT冷冻包埋剂包埋，西德Leitz 1720型冷冻切片机切片，温度-25℃～-30℃，冷冻切片5 μm，贴于玻片上，干燥后，1％火棉胶封片，80％乙醇硬化，水洗后染色。
2 结果
2.1
塑料包埋组 切片较为困难，但只要有耐心，还是能切出完整的切片。成功率达80％，对细胞核着色较困难，苏木精染色时间要延长到10～15 min。切片困难，主要原因考虑为不脱钙直接切片所致。但是我们认为，尽管切片困难，细胞核着色不理想，但是对骨组织内的成分及
骨质疏松
和一些植骨材料的研究有很高的应用价值。
2.2
石蜡包埋组 这种方法是常规方法，已经被广大病理工作者所认可，但是我们认为，这种方法有一定的局限性，只能制作小标本骨切片，或只能制作骨皮质切片，而对植骨材料，或髓腔组织易脱落。对大块骨组织切片不能做出完整的切片。优点，对细胞核染色好。
2.3
明胶浸泡组 这种方法，可切出狗的完整脊椎切片，切片的完整性优于塑料和石蜡切片，但细胞核着色差，需延长苏木精染色时间，方法比较简单，对研究脊椎及全关节具有更实用价值。
3 体会
3.1
塑料包埋适用于不脱钙骨组织切片，对研究骨组织内成分、骨质疏松有较大价值。
3.2
石蜡包埋对较小的骨组织切片较为理想，对活检组织或钙化组织比较适用。
3.3
明胶浸泡冷冻切片法对较大的骨组织较为适用，对研究脊柱及全关节及骨组织与软组织之间的关系，用此种方法较为理想。
作者简介：吕 荣，男，45岁，副主任技师
参考文献
1，刘绍泉.塑料包埋不脱钙骨组织玻璃刀切片技术.中华病理学杂志，1996；25：49
2，吕 荣，南 耘，胡蕴玉等.骨切片固定液和脱钙剂的筛选及效果观察.临床与实验病理学杂志，1992；8（3）：229
3，吕 荣，陶惠仁，石凯军等.明胶浸泡冷冻切片法与石蜡包埋法制作骨组织大切片的对比.临床与实验病理学杂志，1995；11（4）：283
文章转载于《临床与实验病理学杂志》
作者：吕荣 杨光
作者单位：第四军医大学西京医院全军骨科研究所，西安 710032
欢迎光临 中华病理技术论坛 (http://bbs.zhbljs.com/bbs/)
Powered by Discuz! 6.0.0
