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标题: 免疫组化的前处理 [打印本页]

作者: dingwei 时间: 2001-5-30 12:45 标题: 免疫组化的前处理

[这个贴子最后由DINGWEI在 2001/06/25 03:21am 编辑]

浙江大学医学院附属一院丁伟

一、固定：
　　一直以来，我们都在推荐用中性福马林作为常规固定液。那么，中性福马林和酸性福马林到底有什么区别，对免疫组化有无影响，对此我们进行研究。
PH7.0    PH3.5~4.5 酸性固定后用中性再固定
ER  +++       ++ ↓    ++ ↓
PR +++          ++ ↓    ++ ↓
PS2 +++       +++       +++
P53 +++       +++ 略↓ +++ 略↓
C-erb-B2 +++    +++       +++
LCA +++       +++       +++
T（CD45RO） +++  +++ 略↓ +++ 略↓
B（CD20） +++ +++ 略↓ +++ 略↓
CD79a +++       +++       +++
VM +++          +++       +++
DM +++          +++       +++
S-100  +++    +++       +++
SMA +++       +++       +++
CK +++          +++       +++
KT +++          +++ 略↑ +++ 略↑
Ki-67 +++       +++       +++
Bcl-2 +++       +++       +++
HHF-35 +++    +++       +++
CD68 +++       +++       +++
　　由此可见, 中性福马林能很好的保存组织内的抗原，而酸性福马林对大多数抗原也有较好的保存作用，但用酸性福马林固定后的组织,再用中性福马林固定,就失去了意义。如从免疫组化规范化来说，我们一定要用中性福马林作为固定液。但是，还有一问题值得我们去思考，就是中性福马林对HE切片有无影响。
　　我们知道：细胞内的等电点PH值为4.5左右，而苏木素的最佳着色点PH值也在这范围，用中性福马林固定的组织PH值发生了改变，也改变了细胞的等电点，从而使HE染色细胞核颜色发灰，对比不鲜明。
　　由此可见，中性福马林对HE有着非常不良的影响，所以，我们认为，如果有条件的话，最好是做HE的组织与做免疫组化的组织分开处理，做HE的组织用酸性福马林固定，而做免疫组化的组织用中性福马林固定；没有条件的如没特殊要求，还是用酸性福马林固定为佳。特别是送检标本己经用酸性福马林固定过的。
　　组织固定后，应用自来水冲洗，梯度酒精脱水，二甲苯透明。我们提倡这些都在室温或37℃以下的恒温下进行。这无论对HE还是免疫组化都是有利的。
二、浸蜡：
　　我们认为浸蜡温度应控制在60℃以下，浸蜡用的石蜡应经常更换，以减少石蜡中二甲苯的含量。高温下的二甲苯容易使组织发脆，细胞收缩，容易掉片。
三、切片的厚度：
　　一般来说，免疫组织化学染色的切片不需要很薄，如没有特殊的要求，只需4-5微米就可以了。
四、烤片：
　　烤片，我们认为在55℃以下， 2-8小时左右。由于工作的安排，很多人是烤过夜的。我们发现烤片超过18小时的切片，免疫组化染色强度比烤4小时的切片要略弱。特别是烤片温度超过60℃时。免疫组化的前处理已经基本完成。要做好一张免疫组化的切片，在前处理过程中，还有许多问题值得我们去探讨。

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